FK506對糖尿病大鼠早期腎臟肥大的抑制作用及機制的實驗研究.pdf

1、背景與目的：糖尿病腎病(Diabetic nephropathy，DN)是引起終末期腎病(Endstage renal diseaSe，ESRD)主要原因之一，其早期特征性病理改變?yōu)槟I臟肥大、細胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)集聚和基底膜增厚，隨后發(fā)展為腎小球硬化，導致 ESRD。對 DN 發(fā)病機制的研究既往多集中在血糖、血脂代謝紊亂、血流動力學異常、氧化應激與炎癥等方面。近年研究發(fā)現(xiàn)糖尿病狀態(tài)下，多種激素、

2、細胞介質(zhì)及肽類生長因子如胰島素樣生長因子-I(Insulin-like growth factor,IGF-I)與轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming growth factorβ1，TGFβ1)都可引起腎臟肥大與ECM集聚。盡管IGF-I與TGF-β1可以激活多種細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導發(fā)揮其不同的病理牛理作用，但致細胞肥大與ECM集聚作用主要與激活鈣依賴性絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶鈣神經(jīng)蛋白(Calcineurin，CaN)信號轉(zhuǎn)導途徑有關(guān)

3、。本研究旨在探討 CaN抑制劑 FK506 對糖尿病大鼠早期腎臟肥大的抑制作用及其機制。 方法:建立鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)誘導的糖尿病大鼠模型，隨機分成4組：對照組(C)、模型組(DM)、FK506 0.5 mg/kg給藥組(DM+FK506 0.5 mg/kg.)及 FK506 1.0mg/kg給藥組(DM+FK506 1.0 mg/kg)，每組10只。FK506灌胃給藥，對照組和模型組給予

4、等量溶媒，觀察4刷。血糖、肝功能、腎功能與血脂由全自動生化分析儀測定，24小時尿白蛋白測定采用酶聯(lián)免疫方法(Enzyme Immunoassay，EIA)。觀察大鼠腎重/體重、尿白蛋白排泄率(AER)與肌酐清除率(Ccr)變化，并行腎組織病理形態(tài)學分析。應用 Western 印跡或免疫組化方法檢測腎組織.鈣神經(jīng)蛋白(Calcineurin，CaN)、1α(Ⅳ)型膠原、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)與轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)蛋白表

5、達。 結(jié)果：1.各組大鼠一般指標變化：模型組大鼠表現(xiàn)為血糖升高、體重下降、相對腎重(腎重/體重)增加(P<0.01)，F(xiàn)K506 0.5與1.0mg/kg給藥4wk沒有防止大鼠血糖升高、體重下降。FK506 0.5mg/kg給藥組相對腎重較糖尿病組有所下降，但未達統(tǒng)計學意義，F(xiàn)K506 1.0mg/kg給藥組相對腎重明顯低于模型組(P<0.05)。模型組大鼠AER明顯高于對照組(P<0.01)，F(xiàn)K506 0.5與1.0mg/k

6、g 給藥組大鼠AER水平明顯低于模型組(P<0.05，0.01)。FK506 0.5與1.0mg/kg給藥組大鼠Ccr水平與模型組相比，差異無統(tǒng)計學意義。模型組大鼠血TC、TG水平明顯高于對照組(P<0.05)，F(xiàn)K506 0.5與1.0mg/kg給藥組血 TC、TG水平與模型組相比無明顯差異。另外，與對照組相比，模型組、各給藥組血谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶無明顯變化。 2.腎組織病理形態(tài)學變化：模型組4周腎小球平均容量(V<,G>

7、)與損傷指數(shù)(Indices for tubulointerstitial injury,TII)明顯高于對照組(P<0.05，0.01)，提示本模型大鼠已出現(xiàn)腎小球肥大與腎小管.間質(zhì)損害：FK5060.5mg/kg給藥組大鼠V<,G>明顯低于模型組(P<0.05)，TII較模型組有所下降，但差異未達統(tǒng)計學意義，F(xiàn)K506 1.0mg/kg給藥組 V<,G>與TII均明顯低于模型組(P<0.05，0.01)。 3.各組大鼠腎組織

8、 CaN 蛋白表達變化：模型組腎組織。CaN 蛋白表達較對照組增加2.4倍，F(xiàn)K506 0.5與1.0mg/kg給藥4周分別使腎組織CaN蛋白表達下降38.0％與73.2％。 4.各組大鼠腎組織1α(Ⅳ)型膠原表達變化：模型組腎組織1α(Ⅳ)型膠原蛋白表達較對照組增加2.4倍，F(xiàn)K506 0.5，1.0mg/kg給藥4wk分別可使腎組織1α(Ⅳ)型膠原蛋白表達下降34.5％與50.0％。 5.各組大鼠腎組織TGFβ1和α

9、-SMA表達變化：對照組大鼠腎小球與腎小管.間質(zhì)有微弱TGFβ1蛋白表達，模型組腎小球與腎小管-間質(zhì)TGFβ1蛋白表達明顯高于對照組(P<0.01)，K506 0.5與1.0mg/kg給藥組腎小球與腎小管-間質(zhì)TGFβ1蛋白表達明顯低于模型組(P<0.05，0.01)。Westem印跡條帶光密度分析顯示模型組腎組織α-SMA蛋白表達較對照組增加3.5倍，F(xiàn)K506 0.5，1.0mg/kg給藥4周分別可使腎組織α-SMA蛋白表達下降40