IGF-1對體外培養(yǎng)的HKC細(xì)胞表型變化的作用及FK506對HKC轉(zhuǎn)分化的抑制作用.pdf

1、研究目的:(1)在體外培養(yǎng)的條件下,探討IGF-1能否誘導(dǎo)HKC細(xì)胞發(fā)生表型變化,以及IGF-1和TGF-β是否具有協(xié)同作用;(2)FK506對細(xì)胞因子誘導(dǎo)的小管上皮細(xì)胞表型變化的影響,并進(jìn)一步了解FK506對TEMT的影響與NF-κB的活性的關(guān)系.方法及內(nèi)容:該實(shí)驗(yàn)選擇HKC細(xì)胞為研究對象,第一部分,分為4組:(1)陰性對照組;(2)TGF-β(8ng/ml)陽性對照組;(3)IGF-1各濃度組(1,10,50,250ng/ml);(

2、4)TGF-β+IGF-1聯(lián)合用藥組:IGF-1(50ng/ml)+ TGF-β(8ng/ml)、IGF-1(250ng/ml)+ TGF-β(8ng/ml).應(yīng)用形態(tài)學(xué)、間接免疫熒光法,免疫組化雙染技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附法觀察IGF-1、TGF-β、IGF-1與TGF-β聯(lián)合作用組誘導(dǎo)HKC細(xì)胞發(fā)生表型變化和細(xì)胞外基質(zhì)的形成.第二部分,在HKC細(xì)胞培養(yǎng)液中加入FK506,分為以下4組:(1)陰性對照組;(2)TGF-β(8n

3、g/ml)陽性對照組;(3)FK506(0.1、1、10、50ng/ml)組;(4)TGF-β(8ng/ml)+FK506(0.1、1、10、50ng/ml)組;應(yīng)用以上方法,觀察FK506對TGF-β誘導(dǎo)的HKC細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的抑制作用;同時(shí)應(yīng)用間接免疫熒光、激光共聚焦顯微鏡和免疫組化技術(shù),觀察TGF-β和FK506對HKC細(xì)胞NF-κB活性的影響.結(jié)論:(1)在該研究的濃度范圍內(nèi),IGF-1能誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為肌成纖維細(xì)胞,IG

4、F-1可劑量依賴性地刺激HKC細(xì)胞合成和分泌纖粘連蛋白和Ⅰ型膠原;(2)IGF-1和TGF-β聯(lián)合作用可使HKC細(xì)胞表型變化和細(xì)胞外基質(zhì)的形成顯著增加,但無協(xié)同作用;(3)FK506劑量依賴性地抑制TGF-β誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和纖粘連蛋白及Ⅰ型膠原的形成;該濃度下的FK506能抑制基礎(chǔ)狀態(tài)下和TGF-β誘導(dǎo)的HKC細(xì)胞NF-κB 的表達(dá).(4)FK506抑制TGF-β誘導(dǎo)的HKC細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和NF-κB的表達(dá)下調(diào)有一定的相關(guān)性,需