PAR4在背根神經(jīng)節(jié)感覺神經(jīng)元的表達(dá)及與TRPV1的共存.pdf

1、目的：蛋白酶活化受體4(protease-activated receptor，PAR4)，是蛋白酶活化受體家族成員之一，屬于G蛋白偶聯(lián)受體。研究發(fā)現(xiàn)PAR4在正常和炎癥條件下參與調(diào)節(jié)疼痛反應(yīng)，目前PAR4在痛覺調(diào)節(jié)中的作用機(jī)制尚不清楚，可能是經(jīng)過細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制作用于周圍感覺神經(jīng)元，其中部分可能是通過致敏瞬時(shí)受體電位香草酸亞型1(Transient receptor potential vanilloid1TRPV1)參與外周傷害

2、性刺激的調(diào)節(jié)。為了進(jìn)一步了解PAR4在背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion，DRG)初級(jí)感覺神經(jīng)元的表達(dá)，及與傷害性感覺受體TRPV1的共存，探究PAR4在外周傷害性感覺信號(hào)傳導(dǎo)中的作用提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。
　　 方法：⑴應(yīng)用免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)法結(jié)合激光共聚焦顯微鏡技術(shù)，觀察PAR4在大鼠和小鼠DRG初級(jí)感覺神經(jīng)元的表達(dá)及與TRPV1的共存。⑵腹腔內(nèi)注射醋酸建立內(nèi)臟疼痛大鼠動(dòng)物模型，應(yīng)用免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)法結(jié)合激

3、光共聚焦顯微鏡技術(shù)，觀察PAR4在DRG初級(jí)感覺神經(jīng)元的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：①PAR4在小鼠DRG初級(jí)感覺神經(jīng)元的表達(dá)及與TRPV1的共存：免疫熒光顯示小鼠DRG內(nèi)見有大量的感覺神經(jīng)元表達(dá)PAR4，其形態(tài)多為中、小型的圓形、卵圓形，以及少量的大型神經(jīng)元，可見少部分陽(yáng)性神經(jīng)元纖維。有80.5％±3.1％(3672/4558)神經(jīng)元表達(dá)PAR4。免疫熒光雙標(biāo)法顯示DRG內(nèi)可見較多的TRPV1陽(yáng)性神經(jīng)元，均為中、小型感覺神經(jīng)元胞體

4、，許多DRG的PAR4陽(yáng)性神經(jīng)元的表達(dá)均與TRPV1的共存，有76.9％±3.4％(2826/3672)的PAR4陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)TRPV1，有77.4％±3.1％(2826/3647)的TRPV1陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)PAR4。②PAR4在大鼠DRG初級(jí)感覺神經(jīng)元的表達(dá)及與TRPV1的共存：PAR4在大鼠的DRG內(nèi)的表達(dá)與小鼠類似，同樣見有大量的感覺神經(jīng)元表達(dá)PAR4，其形態(tài)多為中小型的圓形、卵圓形，以及少量的大型神經(jīng)元，細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示：有85.

5、4％±4.1％(4337/5078)神經(jīng)元表達(dá)PAR4。免疫熒光雙標(biāo)法顯示有83.5％±3.6％(3623/4337)的PAR4陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)TRPV1，有88.3％±3.5％(3623/4102)的TRPV1陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)PAR4。③PAR4與CGRP在大鼠DRG初級(jí)感覺神經(jīng)元的共存：免疫熒光顯示大鼠DRG內(nèi)見有大量的感覺神經(jīng)元呈CGRP陽(yáng)性，其形態(tài)多為中、小型的圓形、卵圓形，以及少量的大型神經(jīng)元，并觀察到部分CGRP陽(yáng)性神經(jīng)纖維，有

6、75.6％±4.1％(3387/4478)陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)CGRP。免疫熒光雙標(biāo)法顯示有82.3％±4.6％(2788/3387)PAR4陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)CGRP，有64.2％±3.7％(2788/4337)CGRP陽(yáng)性細(xì)胞均表達(dá)PAR4。④TRPV1與CGRP在大鼠DRG初級(jí)感覺神經(jīng)元的共存：DRG內(nèi)TRPV1陽(yáng)性神經(jīng)元與CGRP陽(yáng)性細(xì)胞類似，均為中、小型感覺神經(jīng)元胞體和一些彌散神經(jīng)纖維。免疫熒光雙標(biāo)顯示TRPV1/CGRP在DRG感覺神

7、經(jīng)元內(nèi)廣泛的共存，有83.9％±3.6％(2842/3387)CGRP陽(yáng)性細(xì)胞均表達(dá)TRPV1，有69.2％±3.2％(2842/4102)TRPV1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)CGRP，也可觀察到少量的TRPV1單標(biāo)神經(jīng)元或CGRP單標(biāo)神經(jīng)元。⑤PAR4在內(nèi)臟疼痛大鼠動(dòng)物模型中DRG感覺神經(jīng)元的表達(dá)變化，在內(nèi)臟疼痛大鼠動(dòng)物模型DRG內(nèi)PAR4陽(yáng)性感覺神經(jīng)元的數(shù)量明顯增加，細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示PAR4陽(yáng)性感覺神經(jīng)元的數(shù)量與正常大鼠相比，增長(zhǎng)了11.1％±2.3

8、％，有96.5％±4.3％(5336/5528)神經(jīng)元表達(dá)PAR4。同時(shí)DRG內(nèi)TRPV1陽(yáng)性神經(jīng)元的數(shù)量也明顯增加，有95.0％±4.4％(5110/5378)神經(jīng)元表達(dá)TRPV1。免疫熒光雙標(biāo)顯示有較多的PAR4/TRPV1雙標(biāo)細(xì)胞，分別占PAR4陽(yáng)性和TRPV1陽(yáng)性細(xì)胞的88.8％±3.7％(4742/5336)和92.7％±3.4％(4742/5110)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在大鼠DRG內(nèi)見有許多感覺神經(jīng)元表達(dá)PAR4，并與TRPV1廣