天麻、鉤藤歸經(jīng)理論的基因表達(dá)研究.pdf

1、本研究以治療肝陽上亢證的經(jīng)典藥對(duì)天麻和鉤藤為對(duì)象，利用全基因表達(dá)譜芯片用于中藥歸經(jīng)理論的研究，在基因表達(dá)水平上，定性定量地反映中藥藥理作用機(jī)制的全貌。
　　 天麻、鉤藤的配伍應(yīng)用來源于治療高血壓病肝陽上亢證的經(jīng)典代表方天麻鉤藤飲(出自《中醫(yī)內(nèi)科雜病證治新義》)。
　　 目的：
　　 1.明確“歸肝經(jīng)”藥物的主要效應(yīng)器官，尋找中醫(yī)“臟腑”與解剖學(xué)器官的聯(lián)系；
　　 2.辨析天麻、鉤藤兩者在配伍中的相互作用方

2、式及地位；
　　 3.探討“歸肝經(jīng)”藥物主要作用的生物路徑；
　　 4.闡明天麻“歸肝經(jīng)”的主要作用機(jī)理。
　　 方法：
　　 1.理論研究
　　 通過整理肝陽上亢模型建立的相關(guān)文獻(xiàn)，最終確立最接近理想病癥且造模方式對(duì)藥物研究無干擾的SHR大鼠作為肝陽上亢癥的模型。
　　 通過學(xué)習(xí)生物信息學(xué)，掌握基因差異表達(dá)譜分析方法，整理基因芯片在中藥現(xiàn)代研究中應(yīng)用的相關(guān)文獻(xiàn)，建立基因芯片分析技術(shù)與中藥

3、研究相結(jié)合的模式—“疾病-給藥”差異表達(dá)譜。
　　 2.實(shí)驗(yàn)研究
　　 設(shè)立空白、天麻粗粉、鉤藤煎液、天麻鉤藤合煎劑灌胃給藥四個(gè)平行對(duì)照組別(SHR大鼠連續(xù)灌胃給藥10天，末次給藥30分鐘后處死)，制作四組動(dòng)物的心臟、肝臟、胰腺、肺、腎臟、大腦、大血管七個(gè)組織的病理切片，觀察藥物是否對(duì)組織的病變有效逆轉(zhuǎn)；用液氮研磨法提取四組動(dòng)物肝臟和腎臟的總RNA，共8個(gè)樣本，Cy3單色熒光標(biāo)記后分別和安捷倫大鼠全基因組表達(dá)芯片(Agi

4、lent whole mouse genome)進(jìn)行雜交并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，建立“疾病-給藥”差異表達(dá)譜，篩選目標(biāo)基因，并進(jìn)行聚類分析、生物功能(GO)分析以及生物通路(Pathway)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.天麻組、鉤藤組、天麻鉤藤組SHR大鼠較空白對(duì)照組的腎小球玻璃樣變有明顯好轉(zhuǎn)，腎小球動(dòng)脈血管管壁和肝臟血管增厚情況有逆轉(zhuǎn)，鉤藤組肝臟細(xì)胞出現(xiàn)明顯空泡變性且組內(nèi)個(gè)別大鼠肝臟出現(xiàn)囊泡。
　　 2.8個(gè)樣本的基

5、因差異表達(dá)譜如散點(diǎn)圖(附圖2-1～附圖2-6)。篩選出天麻對(duì)腎臟的作用相關(guān)的基因30個(gè)，鉤藤對(duì)腎臟的作用相關(guān)的基因26個(gè)，天麻對(duì)肝臟的作用相關(guān)的基因16個(gè)，鉤藤對(duì)肝臟的作用相關(guān)的基因15個(gè)。
　　 3.雙向分層聚類分析結(jié)果如圖5-5。
　　 結(jié)論：
　　 1.腎臟、肝臟是天麻、鉤藤的主要效應(yīng)器官；
　　 2.天麻和鉤藤配伍時(shí)，天麻為君藥，鉤藤為佐藥，天麻和鉤藤的配伍使得藥理作用更專注于肝臟，符合“引經(jīng)配對(duì)

6、”理論。
　　 3.肝陽上亢與血脂代謝異常，氨基酸代謝異常，G-蛋白偶聯(lián)受體介導(dǎo)的信號(hào)通路紊亂以及體液失衡有關(guān)，會(huì)出現(xiàn)全身性的炎癥反應(yīng)。
　　 4.對(duì)與肝陽上亢的病患而言，天麻可以調(diào)節(jié)機(jī)體血脂代謝，影響高密度脂肪酸代謝，參與體內(nèi)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)，起到抗動(dòng)脈粥樣硬化作用；能夠抑制肝臟炎癥反應(yīng)；能夠調(diào)節(jié)氨基酸代謝以保護(hù)肝臟；能夠有效調(diào)控G-蛋白偶聯(lián)受體介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路——主要是環(huán)磷酸腺苷(AC)通路，降低患者的血壓；能夠降低多

7、巴胺(DA)和去甲腎上腺素(NE)水平，改善胰島素抵抗，抑制甲狀腺功能亢進(jìn)以平息肝陽；能夠降低血清總膽汁酸的含量，控制血壓保護(hù)靶器官。
　　 5.相較于天麻單藥，合煎劑對(duì)腎臟的一些藥理作用削弱了，而保肝護(hù)肝的作用更加全面更加顯著，使得作用更靶向定位于肝臟。配伍后一些與治療肝陽上亢無關(guān)的藥效也不再發(fā)揮。
　　 6.有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白參與了天麻有效成分的轉(zhuǎn)運(yùn)，而天麻中有效成分并非以金屬離子絡(luò)合物的狀態(tài)存在。
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