天麻鉤藤飲對腦灌注不足大鼠VEGF的表達(dá)和神經(jīng)發(fā)生的影響.pdf

1、背景與目的:臨床以及實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)了慢性腦灌注不足與認(rèn)知功能障礙之間的關(guān)系,慢性腦灌注不足是導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙的一個(gè)重要因素,是血管性認(rèn)知障礙發(fā)展過程中的一個(gè)重要的病理過程.通過永久性雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎(permanentocclusion of bilateral common carotid aaefies,2-vessel occlusion,2VO)建立的2VO模型導(dǎo)致了慢性中度腦血流的減少,構(gòu)建了一個(gè)慢性腦灌注不足的模型.2VO所導(dǎo)

2、致的腦組織的主要病理改變?yōu)?白質(zhì)疏松,膠質(zhì)增生,皮質(zhì)、海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的固縮、缺失;在行為學(xué)上表現(xiàn)為長期的學(xué)習(xí)記憶能力障礙,因此是研究輕度認(rèn)知功能障礙的一個(gè)良好的模型.天麻鉤藤飲這一古老的中藥組方顯示了較好的臨床應(yīng)用效果,可以改善患者的認(rèn)知,但是基礎(chǔ)研究甚少,作用機(jī)制不甚清楚.韓國學(xué)者進(jìn)行的體外研究表明,鉤藤可以促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)和蛋白分泌,那么天麻鉤藤飲這一中藥復(fù)方組分是否也發(fā)揮了這一作用呢? 是否還有其它的作用

3、機(jī)制參與了其神經(jīng)保護(hù)功能呢? 因此,本研究擬通過建立大鼠腦灌注不足模型,觀察天麻鉤藤飲早期干預(yù)對腦灌注不足大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響,以及藥物干預(yù)對腦缺血后血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)的表達(dá)和海馬齒狀回神經(jīng)發(fā)生的影響,探討其可能的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制. 材料與方法:健康SD大鼠,144只,雌雄不限,體重342±16g.實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為正常對照組、假手術(shù)組、模型組和治療組,共

4、4組.每組又分為2周、4周、8周3個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行觀察.采用永久性雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎制各腦灌注不足模型.在造模前、后對動物進(jìn)行Moms水迷宮評價(jià),以篩選合格動物入組.治療組于造模后次日開始給予天麻鉤藤飲(5g/kg'd)灌胃,分別灌胃2周,4周,8周.假手術(shù)組,模型組給予相同體積蒸餾水灌胃;正常對照組不予灌胃處理.在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)結(jié)束后行水迷宮,對大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)行評價(jià).BrdlU標(biāo)記S期細(xì)胞,觀察海馬齒狀回細(xì)胞增殖.動物于處死前12h內(nèi),腹

5、腔注射5-溴-2-脫氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,BrdlJ)(50 mg/kg),1次/4 h,共3次,末次注射4h后處死.免疫組化觀察3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組大鼠的VEGF.及VEGFR-2/Flk-1的表達(dá)變化,以及BrdU標(biāo)記的海馬齒狀回新生細(xì)胞數(shù)量的變化.免疫熒光檢測神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)(標(biāo)記神經(jīng)元)與'VEGF的共表達(dá),即觀察腦缺血是否誘導(dǎo)了神經(jīng)元表達(dá)VEG

6、F. 結(jié)果:(1)行為學(xué)結(jié)果顯示,模型組的潛伏期均明顯延長,與假手術(shù)組大鼠比較具有顯著性差異(P<0.05),表明大鼠學(xué)習(xí)記憶能力明顯受損;治療組大鼠與模型組比較,潛伏期明顯縮短(P<0.05),表明藥物干預(yù)改善了腦缺血后大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力.(2)免疫組化結(jié)果顯示,模型組VEGF的表達(dá)較假手術(shù)組明顯增多(P<0.05),隨后呈現(xiàn)遞減的趨勢.治療組VEGF的表達(dá)較模型組明顯增多(P<0.05或p<0.01).2周治療組的VEGF的

7、表達(dá)較相應(yīng)模型組明顯增多,不僅表達(dá)的細(xì)胞數(shù)量多,且胞漿豐富,染色濃密,部分呈顆粒狀,并且這種高表達(dá)可持續(xù)到4周,8周治療組仍呈中度表達(dá).模型組Flk-1的表達(dá)較假手術(shù)組明顯增多(.P<0.05);治療組Flk-1的表達(dá)較模型組明顯增多(P<0.05或p<0.01).(3)模型組的BrdtJ陽性細(xì)胞較假手術(shù)組明顯增多(P<0.05),治療組較模型組明顯增多(p<0.05或p<0.01),增生的細(xì)胞主要分布于海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層亞顆粒增生帶

8、中.模型組的BrdtU陽性細(xì)胞隨著時(shí)間的推移呈現(xiàn)減少的趨勢,而治療組的BrdtI陽性細(xì)胞卻未隨著時(shí)間的延長則呈現(xiàn)減少的趨勢.(4)免疫熒光觀察到模型組神經(jīng)元VEGF表達(dá)增加. 結(jié)論:腦缺血可以誘導(dǎo)神經(jīng)元VEGF表達(dá)增加,可能是腦缺血后內(nèi)源性的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制之一;天麻鉤藤飲可以改善腦灌注不足后大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力;天麻鉤藤飲可以促進(jìn)腦缺血后VEGF 及Flk-1的表達(dá)增加,可能通過該途徑發(fā)揮腦保護(hù)功能;天麻鉤藤飲可以促進(jìn)海馬齒狀回神經(jīng)