天麻抗真菌蛋白基因植物表達(dá)載體構(gòu)建及辣椒轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、目的：將天麻抗真菌蛋白基因轉(zhuǎn)化“遵椒一號(hào)”辣椒。方法：運(yùn)用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出GAFP的cDNA序列，通過(guò)基因工程技術(shù)構(gòu)建植物表達(dá)載體pBI121-GAFP，并導(dǎo)入“遵椒一號(hào)”辣椒。結(jié)果：（1）通過(guò)酶切鑒定，PCR檢測(cè)及測(cè)序確定植物表達(dá)載體pBI121-GAFP構(gòu)建成功。（2）建立了“遵椒一號(hào)”辣椒的再生體系，優(yōu)化了辣椒子葉外植體不定芽誘導(dǎo)分化和不定芽的伸長(zhǎng)培養(yǎng)基配方。最佳不定芽誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為：MS+LC1．0 mg/L+IAA0．

2、1 mg/L+ABA0．3 mg/L+Spm100μmol/L+AgNO35 mg/L+PD6 ml/L（pH5．8～6．0）；最佳不定芽伸長(zhǎng)培養(yǎng)基為：MS+LC0．1 mg/L+IAA0．2 mg/L+GA31．0 mg/L+Spm100μmol/L+AgNO35 mg/L+PD6 ml/L（pH5．8～6．0）；最佳生根培養(yǎng)基為：1/2MS+IAA1．0 mg/L+NAA0．5mg/L（pH5．8～6．0）。（3）優(yōu)化了重組農(nóng)桿菌E

3、HA105轉(zhuǎn)化辣椒的方法。外植體預(yù)培養(yǎng)2d、農(nóng)桿菌侵染7min、共培養(yǎng)2d為比較理想的轉(zhuǎn)化條件。（4）將GAFP基因?qū)搿白窠芬惶?hào)”辣椒。轉(zhuǎn)化后再生的植株經(jīng)PCR檢測(cè)，初步證實(shí)GAFP基因已經(jīng)整合到辣椒基因組中，得到了GAFP基因轉(zhuǎn)化“遵椒一號(hào)”辣椒植株。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法用含有抗卡那霉素的nptⅡ基因的載體將GAFP基因?qū)氲嚼苯吠庵搀w中，然后在含有卡那霉素的選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選培養(yǎng)，并經(jīng)過(guò)PCR檢測(cè)，獲得一批GAFP轉(zhuǎn)基因