無血清培養(yǎng)基體外分離培養(yǎng)人膠質瘤干細胞與鑒定.pdf

1、目的：探討利用無血清培養(yǎng)基從原發(fā)膠質母細胞瘤組織中分離培養(yǎng)膠質瘤干細胞的可行性；觀察并比較膠質瘤干細胞異種動物體內(nèi)成瘤能力。 方法：無菌條件下取腫瘤深部無壞死囊變、未電凝組織，剪切消化成單細胞懸液后，加入含堿性成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、B27添加劑的無血清DMEM/F12培養(yǎng)基，體外分離培養(yǎng)獲得膠質瘤干細胞。待培養(yǎng)孔中細胞團數(shù)量增多、培養(yǎng)液剛剛變色時，吸取含有細胞團的培養(yǎng)液進行傳代。取第3代膠質瘤干細胞，加入巢蛋白和CD

2、133抗體行免疫熒光檢測；加入含體積分數(shù)為0.1胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基誘導5d，行膠質纖維酸性蛋白免疫熒光染色觀察分化情況。將不同濃度膠質瘤干細胞與膠質瘤細胞接種于4w齡Balb/c裸鼠腋下，觀察腫瘤形成情況，接種6w后，將裸鼠體內(nèi)形成的腫瘤取下，經(jīng)過固定、脫水、浸蠟、包埋后行HE染色。 結果： 1、原代培養(yǎng)7～10d可形成大小不一的細胞團，球形或近似球形，呈懸浮或半懸浮狀態(tài)生長，細胞形態(tài)均一，折光性好；傳代2

3、4h后次代細胞團形成，細胞的大小、形態(tài)與原代無明顯差別，連續(xù)傳代5次后細胞團增殖活躍。 2、第3代膠質瘤干細胞呈巢蛋白和CD133陽性表達， 3、加入胎牛血清后細胞球貼壁分化，呈膠質纖維酸性蛋白陽性。 4、膠質瘤干細胞接種于裸鼠體內(nèi)可形成膠質瘤組織，移植瘤經(jīng)HE染色證明為膠質瘤組織。 結論： 人腦膠質瘤組織中存在膠質瘤干細胞，在體外無血清條件下可保持未分化的懸浮狀態(tài)；加入血清后貼壁分化呈膠質瘤細胞