人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定和分離的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的培養(yǎng)方法，觀察膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的生長特性，同時(shí)鑒定和分離人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞，從而為腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制和治療提供新的研究方向。 方法：無菌狀態(tài)下取人腦膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本。用無血清培養(yǎng)基(DMEM／F12，添加入EGF、bFGF和B27)培養(yǎng)。用二步法行Nestin和GFAP免疫組織化學(xué)檢測，用MTT‘法檢測細(xì)胞球的增殖情況。染色體核型分析檢測人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的染色體變異情況。采用免疫磁珠分選系統(tǒng)，分離出CDl33

2、<'+>細(xì)胞和CDl33<'->細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)檢測分離效率和細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖情況。觀察分離后的CDl33<'+>細(xì)胞和CDt33<'->細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中的生長和傳代情況。 結(jié)果：(1)用無血清培養(yǎng)基成功培養(yǎng)出人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞。在無血清培養(yǎng)基中呈懸浮生長的細(xì)胞球，經(jīng)傳代后能再次形成懸浮生長的細(xì)胞球。(2)懸浮生長的細(xì)胞球能在含胎牛血清的培養(yǎng)基中分化。免疫組織化學(xué)檢測示腫瘤細(xì)胞球的Nestin表達(dá)呈陽性。分化后GFAP表達(dá)呈

3、陽性。(3)MTl、法檢測示腦腫瘤干細(xì)胞的增殖高峰是3天左右。(4)核型分析顯示培養(yǎng)的細(xì)胞球染色體為異倍體，且可見部分?jǐn)嗔讶旧w片斷。(5)免疫磁珠分選的結(jié)果示分離出來的CDl33<'+>細(xì)胞占原有細(xì)胞總數(shù)的5％左右。分離后的CDl33<'+>細(xì)胞很易再次形成腫瘤球，而分離后的CDl33<'->細(xì)胞形成腫瘤球的能力很弱。(6)流式細(xì)胞儀檢測出腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中的CDl33<'+>細(xì)胞細(xì)胞周期中的S和G2-M期所占比例明顯高于CDl33<'