胰腺干細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定.pdf

1、目的： 采用細(xì)胞培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化技術(shù)，分離培養(yǎng)大鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞并使之轉(zhuǎn)分化為胰腺干細(xì)胞及胰島素分泌細(xì)胞(胰島樣細(xì)胞)，為進(jìn)一步開展胰島移植的臨床應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。 方法： 以V型膠原酶消化加濾網(wǎng)過濾法，分離SD大鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞，培養(yǎng)于含10％胎牛血清DMEM/F12培養(yǎng)液，用添加bFGF、EGF等細(xì)胞因子的基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)，7天后可形成單層，免疫細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定其表面標(biāo)志ck-19的表達(dá)，當(dāng)細(xì)胞擴(kuò)增、融合

2、至80-90％時(shí)，通過誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基，誘導(dǎo)胰腺胰腺干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為胰島樣細(xì)胞團(tuán)，3周后對(duì)轉(zhuǎn)分化后的細(xì)胞進(jìn)行DTZ染色檢測(cè)胰島樣細(xì)胞團(tuán)內(nèi)是否有Insu-lin。 結(jié)果： 成功分離、純化了大鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞，并使其得到有效擴(kuò)增，有效抑制了胰島細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的污染，純化后大部分細(xì)胞表達(dá)ck-19(胰腺干細(xì)胞的標(biāo)志)陽性，誘導(dǎo)后細(xì)胞逐漸增大、變形，并出現(xiàn)類圓形小細(xì)胞，聚集成團(tuán)，繼而得到圓形或橢圓形的胰島樣團(tuán)狀結(jié)構(gòu)，細(xì)胞團(tuán)慢慢增