以DNA回旋酶B亞基為靶點的抗結(jié)核藥物篩選模型的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的慢性傳染病。據(jù)估計，目前全世界每年約有八百萬新增病例和三百萬患者死亡，是死亡率最高的感染性疾病。加之多重耐藥菌株的出現(xiàn)和艾滋病雙重感染的威脅，1993年，世界衛(wèi)生組織宣布全球處于結(jié)核病威脅的緊迫狀態(tài)。為此，結(jié)核分枝桿菌感染的有效治療迫切需要開發(fā)新的藥物和新的藥物篩選模型。 本文通過紫外線氯化鋰復(fù)合誘變和微波處理的先后作用，篩選新生霉素特異性超敏感菌株M．phleiSS1和超耐藥菌株M．phleiR

2、R2，其MIC值分別為0.4μgml/L和200μgml/L。 利用野生株M．phlei1180、超敏感菌株M．phleiSS1與超耐藥菌株M．phleiRR2的活性差異，建立以DNA回旋酶B亞基為靶點的抗結(jié)核分枝桿菌藥物篩選模型。 采用定量紙片法，測定不同作用機制的藥物對出發(fā)菌株M．phlei1180，超敏感菌株M．phleiSS1和超耐藥菌株M．phleiRR2的抑制作用。說明以草分枝桿菌M．phlei1180、M．

3、phleiSS1和M．phleiRR2作為檢定菌進(jìn)行定向篩選以DNA回旋酶B亞基為靶點的抗結(jié)核分枝桿菌藥物具有可行性。 采用PCR技術(shù)將野生株M．phlei1180、超敏感菌株M．phleiSS1與超耐藥菌株M．phleiRR2的gyrB基因進(jìn)行克隆，通過與野生株M．phlei1180的gyrB序列進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)超耐藥菌株M．phleiRR2的gyrB基因序列從120bp處就開始發(fā)生了較大范圍的突變，而超敏感菌株M．phleiS

4、S1的gyrB基因序列在570-630bp和690-1100bp處也發(fā)生了較大范圍的突變，正是這些突變造成它們對新生霉素的敏感性發(fā)生改變，從而對所構(gòu)建的抗結(jié)核藥物篩選模型在分子水平上進(jìn)行了初步驗證。 應(yīng)用該模型對175個化學(xué)合成擬抗結(jié)核化合物進(jìn)行初篩，獲得五個陽性化合物CZQ-01+、CZQ-06+、CZQ-07+、CZQ-43、BK1120，其中CZQ-06+和CZQ-43可能為非新生霉素類的作用于DNA回旋酶B亞基的抑制劑，