以結(jié)核桿菌異檸檬酸裂解酶為靶點(diǎn)的抗結(jié)核藥物篩選模型的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、異檸檬酸裂解酶(Isocitrate Lyase,ICL)是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵限速酶,它催化異檸檬酸產(chǎn)生琥珀酸和乙醛酸.最新的研究表明:處于持留狀態(tài)的結(jié)核桿菌通過(guò)乙醛酸循環(huán)途徑獲取能量,維持其在宿主體內(nèi)的長(zhǎng)期存在,異檸檬酸裂解酶對(duì)結(jié)核桿菌的持留性起著決定性作用.我們以結(jié)核桿菌H<,37>Rv基因組為模板,通過(guò)分子生物學(xué)方法,克隆、表達(dá)編碼異檸檬酸裂解酶的基因Rv0467,構(gòu)建了高效表達(dá)結(jié)核桿菌H37Rv異檸檬酸裂解酶的基因工程菌;通過(guò)金屬

2、螯合層析方法對(duì)工程菌的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化,獲得純度在90%以上異檸檬酸裂解酶,建立了異檸檬酸裂解酶活性的測(cè)定方法;并在此基礎(chǔ)上建立了以異檸檬酸裂解酶為靶點(diǎn)、抗持留性結(jié)核桿菌的新型抗結(jié)核藥物篩選模型.應(yīng)用該模型對(duì)2000個(gè)微生物發(fā)酵液進(jìn)行了篩選,得到82個(gè)初篩陽(yáng)性菌株,初篩陽(yáng)性率為4.1%.對(duì)82陽(yáng)性菌株復(fù)篩后,得到5個(gè)活性穩(wěn)定的陽(yáng)性菌株,復(fù)篩陽(yáng)性率為6.1%.對(duì)其中活性較強(qiáng)的陽(yáng)性菌株No.8081進(jìn)行了初步的化學(xué)研究,結(jié)果表明:發(fā)酵液中既