結(jié)核桿菌DNA回旋44酶B亞基的克隆表達及其抑制劑的分離純化研究.pdf

1、DNA回旋酶是細菌所特有的一種拓撲異構(gòu)酶，該酶由兩個A亞基和兩個B亞基聚合而成。A、B亞基分別有各自的功能區(qū)，共同決定該酶的生物學(xué)功能。它能夠利用.ATP的能量將共價閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)轉(zhuǎn)變?yōu)樨摮菪鼶NA，從而維持細菌體內(nèi)正常的超螺旋水平。篩選結(jié)核桿菌回旋酶抑制劑有可能獲得新型抗結(jié)核藥物。
　　 本課題組應(yīng)用細胞水平的以DNA回旋酶B亞基為靶點的抗結(jié)核藥物篩選模型，篩選得到了25個陽性菌株，本研究對這些菌株進行了再篩

2、選，對活性穩(wěn)定的陽性菌株103A—09005和103A—00463進行深入研究。菌株103A—09005的發(fā)酵液經(jīng)大孔樹脂柱層析，硅膠柱，HPLC分離得到了單一組分的活性化合物9005B，該化合物對H37Rv的MIC為64～128 ug/ml，并經(jīng)過質(zhì)譜、碳譜、氫譜等進行結(jié)構(gòu)確證研究，鑒定9005B為放線菌素X2。菌株103A—00463的發(fā)酵液經(jīng)大孔樹脂柱層析，ODS柱層析，得到純度約為28.15％的陽性化合物03—0463。同時，采