缺氧對牙周炎大鼠模型CRP、sICAM-1及ICAM-1-LFA-1影響的研究.pdf

1、牙周炎(periodontal disease)是口腔兩大類主要疾病之一,在世界范圍內(nèi)均有較高的患病率,在我國其患病率更居于齲病之上。牙周炎會導致牙齦炎癥、牙周袋形成、牙槽骨吸收以及牙齒松動,最終可導致牙齒脫落,是造成健康人失牙的最主要原因之一。高原環(huán)境缺氧、寒冷,氣壓較低,尤其是缺氧,引起紅細胞數(shù)量增多,血液流變學發(fā)生“濃、粘、聚、凝”的變化,容易導致微循環(huán)障礙,造成組織局部缺氧和防御能力的下降。有文獻報道,WHO對35個國家統(tǒng)計資料

2、表明,牙周炎患病率在50％左右,而在高原環(huán)境下牙周炎患病率明顯高于平原人群(70.4％),而且移居人群隨著移居時間的延長,其牙周炎患病率日趨上升,說明高原缺氧等惡劣環(huán)境是引起牙周炎患病率增高的重要原因之一。我國不同海拔高度均有居民,高原環(huán)境更加容易引發(fā)牙周疾病,危害高原地區(qū)人們的生理和心理健康,嚴重影響人們的生活質(zhì)量。目前,國內(nèi)、外對于高原地區(qū)牙周疾病的研究極少,僅見局部地區(qū)小范圍、小樣本的流行病學方面的調(diào)查,而高原特殊條件下牙周組織超

3、微結(jié)構(gòu)、牙周微循環(huán)、牙周微生態(tài)、細胞活性改變等深入性研究尚處于空白。
　　 目的和意義:
　　 牙周病是人類易患的常見病、多發(fā)病,涉及面廣,是人群中導致失牙的主要原因,可波及各年齡人群,并與全身的健康密切相關(guān),因此對牙周病發(fā)病機制、預(yù)防及治療的研究成為口腔領(lǐng)域關(guān)注的重點課題。高原特殊條件下牙周炎發(fā)病率高,因此,本研究通過實驗室模擬高原缺氧條件建立SD大鼠缺氧牙周炎模型,檢測實驗牙牙齦指數(shù)(GI)、菌斑指數(shù)(PLI)、探診

4、深度(PD)、牙槽骨吸收度(ABL)及組織病理學改變,作為評價建模成功與否的標準。評判建模成功后,檢測并分析SD大鼠齦溝液中C-反應(yīng)蛋白(C-reaction protein,CRP)、可溶性細胞間黏附分子-1(Soluble intercellular adhesionmolecule-1,sICAM-1)水平及牙齦組織中細胞間黏附分子-1(intercellular adhesionmolecule-1,ICAM-1)、淋巴細胞功能

5、相關(guān)性抗原-1(leukocyte function-associatedantigen-1,LFA-1)的表達,研究高原牙周病的發(fā)生、發(fā)展機制及探索缺氧狀態(tài)下免疫黏附系統(tǒng)的改變對牙周炎的影響,為今后制定系統(tǒng)的高原牙周疾病預(yù)防計劃和治療措施提供參考和依據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 1.建立牙周炎組大鼠模型及模型評估
　　 將80只(200±10)g,雌雄各半,健康的SD大鼠隨機分為4組:常氧對照組(A組)(重慶

6、平均海拔高度400 m)、常氧牙周炎組(B組)、模擬高原缺氧對照組(C組)(海拔5000 m)和模擬高原缺氧牙周炎組(D組),每組20只。通過正畸結(jié)扎絲結(jié)扎牙頸部、喂養(yǎng)高糖飲食、口腔涂菌及肌肉注射激素的綜合方法建立常氧和模擬高原缺氧牙周炎組大鼠模型,8周后檢測4組大鼠GI、PLI、PD、ABL及組織病理學改變,判斷建模是否成功。
　　 2.復(fù)制牙周炎大鼠模型,8周后取大鼠齦溝液,ELISA法檢測4組大鼠齦溝液中CRP、sICAM

7、-1濃度,進一步確定上述介質(zhì)在高原環(huán)境下是否與牙周炎的發(fā)生存在相關(guān)性及其程度。
　　 3.復(fù)制牙周炎大鼠模型,8周后取大鼠牙周組織,通過免疫組化PV法檢測ICAM-1/LFA-1在4組大鼠牙齦組織中的表達,探討ICAM-1/LFA-1介導的免疫黏附過程是否參與和調(diào)節(jié)高原牙周炎的發(fā)生。
　　 結(jié)果：
　　 1.X線片觀察:A、C組大鼠實驗牙的牙槽嵴高度正常;B、D組實驗牙的牙槽嵴高度明顯降低,呈混合型吸收。組織病理

8、學改變:A組大鼠牙齦完整,結(jié)合上皮附著正常,牙周膜纖維排列整齊,無牙槽骨吸收,未見明顯組織病理學改變;B組大鼠實驗牙溝內(nèi)上皮糜爛,向結(jié)締組織內(nèi)增生,有大量炎性細胞浸潤,牙周膜纖維排列紊亂,牙周膜間隙增寬,牙槽嵴骨吸收,表面可見吸收凹陷;C組大鼠實驗牙結(jié)合上皮完整,可見少量炎性細胞浸潤;D組大鼠實驗牙牙間乳頭上皮潰瘍、壞死,上皮釘突增生,可見炎癥細胞浸潤,并出現(xiàn)深的牙周袋,結(jié)合上皮向根方增殖和遷移,牙周膜間隙增寬,牙周膜纖維排列紊亂或斷裂

9、,牙槽嵴呈混合型吸收,可見破骨細胞位于骨吸收陷窩,牙槽骨吸收近根尖,牙髓血管充血明顯,有骨小梁稀疏及骨沉積。
　　 GI、PD及ABL指數(shù)在B組與A組,D組與C組,C組與A組,D組與B組比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。PLI指數(shù)在B組與A組,D組與C組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05),在C組與A組,D組與B組比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 2.8周后ELISA法檢測4組大鼠齦溝液中CRP、sICAM-1濃度

10、。A、B、C、D組GCF中CRP濃度分別為(6.33±1.58)μg/mL、(13.47±1.98)μg/mL、(7.76±1.84)μg/mL、(16.26±2.14)μg/mL,B組與A組,D組與C組,C組與A組,D組與B組比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05),其中以D組升高最為顯著。A、B、C、D組GCF中sICAM-1濃度分別為(21.98±2.93)ng/mL,(32.20±3.80)ng/mL,(23.44±3.81)ng/m

11、L,(36.64±2.64.)ng/mL,B組與A組、D組與C組,C組與A組,D組與B組比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05),其中以D組升高最為顯著。
　　 3.8周后免疫組化PV法檢測4組大鼠牙齦組織中ICAM-1/LFA-1的表達。A、B、C、D組牙齦組織中ICAM-1的OD值在B組與A組,D組與C組,C組與A組,D組與B組比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。A、B、C、D組LFA-1的OD值在B組與A組、D組與C組,C組與A

12、組,D組與B組比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.采用結(jié)扎牙頸部、喂養(yǎng)高糖飲食、口腔涂菌及肌肉注射激素的綜合方法可以建立常氧大鼠牙周炎模型;將綜合方法作用的大鼠放入模擬海拔5000 m的低壓氧艙,建立模擬高原缺氧大鼠牙周炎模型同樣具有可行性。
　　 2.高原缺氧牙周炎組大鼠齦溝液中CRP、sICAM-1水平高于常氧牙周炎組,提示高原缺氧環(huán)境下牙周炎的病變程度更嚴重。
　　 3.模