線粒體糖尿病的一例患者的家系調(diào)查與基因分析.pdf

1、目的:通過對1例臨床表現(xiàn)為“糖尿病、聽力下降、視神經(jīng)萎縮、尿崩癥、高乳酸血癥”的患者及其家系進(jìn)行WFS1和線粒體基因突變及其突變雜胞質(zhì)性程度的檢測，對其進(jìn)行基因診斷。
　　方法:(1)收集相關(guān)臨床資料。(2)抽取先證者及部分家系成員的靜脈抗凝血，提取其外周血白細(xì)胞DNA。(3)對先證者和部分家系成員的外周血白細(xì)胞DNA進(jìn)行直接PCR測序，尋找突變基因。(4)構(gòu)建含有野生型及突變型的質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品，利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測線粒

2、體基因突變攜帶者的突變雜胞質(zhì)性程度。
　　結(jié)果:在先證者的外周血白細(xì)胞中檢測到wFS1第3號外顯子第35位A堿基缺失，造成雜合性移碼變異。突變導(dǎo)致Wolfram蛋白翻譯提前終止和氨基酸序列異常。其父親與妹妹亦存在該雜合突變，母親基因型正常。PCR直接測序法發(fā)現(xiàn)，在先證者的線粒體DNA中發(fā)現(xiàn)A3243G突變，突變?yōu)殡s胞質(zhì)性，在其母系親屬中，除先證者的妹妹及小表妹外，均發(fā)現(xiàn)該突變。此外，在先證者及其母系親屬中均發(fā)現(xiàn)線粒體DNA8271