Nodal-Cripto-1信號(hào)分子用于黑色素瘤治療策略的研究.pdf

1、近年來(lái),惡性黑色素瘤的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)快速增長(zhǎng),已經(jīng)成為人類(lèi)皮膚類(lèi)癌癥中第三大疾病,并且由于它的預(yù)后高風(fēng)險(xiǎn)和極高的腫瘤轉(zhuǎn)移率大大提高了人們治愈它的難度。盡管人們對(duì)黑色素瘤的研究數(shù)十年來(lái)從未間斷,但患者的存活率卻始終得不到有效提升,尤其當(dāng)患者體內(nèi)形成轉(zhuǎn)移瘤后,問(wèn)題將變得更加麻煩。
　　研究表明,胚胎微環(huán)境具有逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞惡性表型的作用,這其中Nodal-Cripto-1信號(hào)分子起到了決定性作用。本論文基于腫瘤發(fā)生的組織結(jié)構(gòu)場(chǎng)學(xué)說(shuō)和

2、表觀遺傳學(xué)理論,利用細(xì)胞微囊化技術(shù),將能夠穩(wěn)定分泌Nodal抑制因子Lefty和Nodal受體Cripto-1單克隆抗體的細(xì)胞株包覆在微囊內(nèi),成功構(gòu)建了微囊緩釋系統(tǒng),通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探究,證實(shí)該緩釋系統(tǒng)能夠抑制B16腫瘤的生長(zhǎng)。
　　本研究首先通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)成功構(gòu)建了HEK293-pCDNA3.1-LEFTY1和HEK293-IRES-GFP-LEFTY2細(xì)胞株,經(jīng)檢測(cè)該細(xì)胞株具有穩(wěn)定表達(dá)Lefty1和Lefty2的能力;并通過(guò)雜

3、交瘤技術(shù)成功制備出抗Cripto-1-KVFELGLVAGLGHQE多肽的單克隆抗體細(xì)胞株2株,命名為2B11和2H7,經(jīng)檢測(cè)其ELISA效價(jià)分別為1:32000和1:16000。
　　利用實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的高壓靜電裝置,我們使用高壓滴定法成功制備出直徑200μm的明膠-海藻酸鈉復(fù)合細(xì)胞微囊,經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞能夠在微囊內(nèi)貼附生長(zhǎng);為確保微囊結(jié)構(gòu)穩(wěn)固,我們根據(jù)正負(fù)離子間易形成離子鍵的原理,利用多聚賴(lài)氨酸和海藻酸鈉對(duì)微囊進(jìn)行多層包覆,實(shí)驗(yàn)證明

4、該微囊能在ICR小鼠體內(nèi)存在3周以上。
　　利用該細(xì)胞微囊,通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探究,我們發(fā)現(xiàn):Lefty1能夠促進(jìn)B16細(xì)胞凋亡,并將B16腫瘤細(xì)胞逆轉(zhuǎn)為惡性程度低的黑色素樣細(xì)胞,從而抑制B16腫瘤的生長(zhǎng);2B11分泌的抗Cripto-1單克隆抗體能夠抑制B16腫瘤血管再生,并降低腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力,從而顯著抑制B16腫瘤的生長(zhǎng),并表現(xiàn)出治愈B16腫瘤的趨勢(shì)。
　　該方法將工程化外源細(xì)胞包覆到微囊內(nèi),避免了細(xì)胞移植的異體反