清肝化瘀口服液對(duì)介入治療肝癌患者免疫功能及腫瘤轉(zhuǎn)移影響的研究.pdf

1、目的: 原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)以下簡(jiǎn)稱原發(fā)性肝癌，為世界常見難治的惡性腫瘤之一。本研究對(duì)經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈內(nèi)化療栓塞術(shù)(TACE)術(shù)后患者給予中藥聯(lián)合治療，檢測(cè)中藥清肝化瘀口服液對(duì)原發(fā)性肝癌患者肝動(dòng)脈化療栓塞(TACE)術(shù)后血液中CD3+，CD4+，CD4+/CD8+、自然殺傷細(xì)胞(NK)及甲胎蛋白(AFP)的變化，測(cè)定患者外周血中VEGF及COX-2的含量變化，觀察患者綜合指標(biāo)，探討中藥對(duì)TACE術(shù)后機(jī)體免疫功能、腫瘤轉(zhuǎn)移潛能及生存質(zhì)量的影

2、響，揭示清肝化瘀口服液對(duì)抑制肝癌細(xì)胞增殖、降低肝癌細(xì)胞COX-2、VEGF表達(dá)的作用，從免疫學(xué)和原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移兩方面闡明清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療在原發(fā)性肝癌治療中提高免疫力，減輕毒副作用，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移等方而，進(jìn)一步探討中藥治療原發(fā)性肝癌的作用以及作用靶點(diǎn)，從而增強(qiáng)病人免疫功能、提高原發(fā)性肝癌患者的生存期，為中藥的臨床研究提供試驗(yàn)依據(jù)。 方法: 1.病例選擇：隨機(jī)選取我院2006年2月至2007年2月間住院原發(fā)性肝癌患者

3、60例，男38例，女22例，年齡48～65歲，平均56.3±7.7歲。所有患者均符合以下診斷標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)后組織學(xué)檢查為原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌；②影像學(xué)檢查有明確實(shí)性占位；③甲胎蛋白(AFP)>200μg/L，持續(xù)4周以上。臨床分期按2001年9月中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì)制定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)患者分期，Ⅰ期8例，Ⅱ期42例，Ⅲ期10例。 2.試驗(yàn)分組：隨機(jī)將患者分為試驗(yàn)組及對(duì)照組。 試驗(yàn)組即TACE+中藥組：原發(fā)性肝癌患者30例，男20例，女10例

4、，平均年齡55.5±8.7歲，其中Ⅰ期5例，Ⅱ期19例，Ⅲ期6例。對(duì)照組即單純TACE組：原發(fā)性肝癌患者30例，男18例，女12例，平均年齡56.9±7.9歲，其中Ⅰ期3例，Ⅱ期23例，Ⅲ期4例。 3.標(biāo)本采集：分別于介入術(shù)前1天和介入術(shù)后第28天早晨空腹靜脈采集樣血5ml，分裝不抗凝管與肝素抗凝管，不抗凝管4℃，2500r/min離心10分鐘，分離血清，-30℃保存待測(cè)；抗凝管直接送檢。 4 外周血T細(xì)胞亞群的檢測(cè)：選

5、用三色熒光標(biāo)記的免抗試劑直接熒光染色，采用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行測(cè)定兩組患者治療前后外周血CD3+，CD4+，CD4+/CD8+、NK細(xì)胞活性。 5 血清細(xì)胞因子檢測(cè)：雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測(cè)兩組患者治療前后血清中TNF-α和IL-2水平。 6 ELISA法檢測(cè)兩組患者治療前后外周血中VEGF蛋白水平表達(dá)。 7 RT-PCR法檢測(cè)兩組患者治療前后外周血有核細(xì)胞中COX-2基因表達(dá)。 8 測(cè)定T

6、ACE+中藥組及單純TACE組患者治療前后AFP水平 9 檢測(cè)兩組患者治療后病灶變化及肝外轉(zhuǎn)移情況：CT和/或彩色多譜勒超聲檢查腫瘤最大直徑乘以其垂直直徑與治療前比較；CT和/或超聲及胸片檢查，隨訪觀察肺、骨、腦及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況。 10 對(duì)兩組患者治療后的療效進(jìn)行判定：按照WHO制定的實(shí)體瘤客觀評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定及分析。判定標(biāo)準(zhǔn)為：①完全緩解為病灶全部吸收；②部分緩解為病灶部分緩解；③無(wú)變化為病灶無(wú)變化；④病情進(jìn)展為病灶

7、進(jìn)展。 11 對(duì)兩組患者治療后生活質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)：根據(jù)卡氏功能狀態(tài)(KPS)評(píng)分，以治療后較治療前增加>10分為改善，減少>10分為下降，變化≤10分為穩(wěn)定。 12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：數(shù)據(jù)處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用成組設(shè)計(jì)的t檢驗(yàn)；同組治療前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用X2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1.TACE+中藥組及

8、單純TACE組兩組患者T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞比較：兩組患者治療前外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK測(cè)定值無(wú)顯著性差異，兩組具有可比性；原發(fā)性肝癌介入治療后28日時(shí)，檢測(cè)患者外周血中CD3+，CD4+，CD4+/CD8+、NK細(xì)胞測(cè)定值分別為0.23±0.18，0.18±0.04，1.12±0.46及10.68±3.01，經(jīng)清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療后患者外周血中CD3+，CD4+，CD4+/CD8+、NK細(xì)胞測(cè)定值分別為0

9、.55±0.11，0.35±0.09，1.65±0.29及31.07±6.56，結(jié)果顯示經(jīng)清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療后外周血中CD3+，CD4+，CD4+/CD8+、NK細(xì)胞較單純介入治療組明顯增高(P<0.05)，提示清肝化瘀口服液可有效增強(qiáng)原發(fā)性肝癌介入治療患者的細(xì)胞免疫。 2.原發(fā)性肝癌患者介入治療前后血清TNF-α和IL-2水平比較：患者經(jīng)介入治療后TNF-α濃度明顯下降(P<0.05)，IL-2濃度增高。 3.

10、TACE+中藥組及單純TACE組介入治療前后外周血細(xì)胞因子TNF-α及IL-2的比較：兩組患者治療前外周血細(xì)胞因子TNF-α及IL-2測(cè)定值無(wú)顯著性差異，兩組具有可比性；TACE+中藥組介入治療后外周血細(xì)胞因子TNF-α含量為10.85±1.67，顯著低于單純TACE組的13.56±1.55，說(shuō)明清肝化瘀口服液可協(xié)助TACE有效降低TNF-α表達(dá)量(P<0.05)：TACE+中藥組介入治療后外周血細(xì)胞因子IL-2含量為32.83±3.0

11、3，高于單純TACE組的28.05±2.95，說(shuō)明清肝化瘀口服液可協(xié)助TACE有效增強(qiáng)IL-2的表達(dá)(P<0.05)。 4 TACE+中藥組及單純TACE組介入治療前后外周血中VEGF表達(dá)的比較：兩組患者治療前，血清VEGF表達(dá)量無(wú)顯著性差異，兩組具有可比性；原發(fā)性肝癌患者介入治療后28日時(shí)，檢測(cè)患者外周血中VEGF表達(dá)量為456.08±175.49，經(jīng)清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療后患者外周血中VEGF表達(dá)量為207.49±93.

12、22，結(jié)果顯示清肝化瘀口服液聯(lián)合治療可有效降低介入治療后增高的VEGF(P<0.05)。 5 TACE+中藥組及單純TACE組介入治療前后外周血有核細(xì)胞中COX-2表達(dá)比較：治療前，兩組患者COX-2陽(yáng)性表達(dá)率及表達(dá)量無(wú)顯著性差異，兩組具有可比性；介入治療后28日時(shí)，檢測(cè)TACE+中藥組與單純TACE治療組患者外周血有核細(xì)胞中COX-2表達(dá)量比較發(fā)現(xiàn)，經(jīng)清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療后患者外周血有核細(xì)胞中COX-2表達(dá)陽(yáng)性率為47.

13、77％，明顯低于單純TACE治療組的55.69％(P<0.05)，同時(shí)表達(dá)量也低于單純TACE治療組。提示清肝化瘀口服液可有效降低原發(fā)性肝癌介入治療患者外周血有核細(xì)胞中COX-2的表達(dá)。 6 原發(fā)性肝癌患者中藥清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療后患者中有6例發(fā)生肝外轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率為20％，單純TACE組發(fā)生肝外轉(zhuǎn)移14例，肝外轉(zhuǎn)移率為43.3％，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 7 原發(fā)性肝癌患者TACE+中藥組，部分緩解患

14、者24例，有效率為80％，單純TACE治療組部分緩解者12例，有效率為40％，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 8 原發(fā)性肝癌患者中藥清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療后KPS評(píng)分后判定，生活質(zhì)量改善者13例，改善率為43.3％，單純TACE組生活質(zhì)量改善者6例，改善率僅20％，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論: 1.TACE+中藥組NK細(xì)胞下降的幅度低于單純TACE治療組，CD3+，CD4+，CD

15、4+/CD8+的值高于單純TACE治療組說(shuō)明清肝化瘀口服液對(duì)化療引起的細(xì)胞免疫抑制有一定的保護(hù)作用。 2.TACE+中藥組外周血中VEGF及COX-2表達(dá)顯著降低，說(shuō)明TACE聯(lián)合應(yīng)用清肝化瘀口服液在抑制腫瘤內(nèi)血管生成、防止腫瘤轉(zhuǎn)移中具有重要作用。 3.TACE+中藥組在瘤體客觀療效及臨床癥狀的緩解率上均優(yōu)于單純TACE治療組，說(shuō)明化療介入聯(lián)合應(yīng)用清肝化瘀口服液治療原發(fā)性肝癌在瘤體縮小、緩解臨床癥狀方面優(yōu)于單純西醫(yī)治療。

16、 4 治療后兩組病例生活質(zhì)量的比較，TACE+中藥組優(yōu)于單純TACE治療組，提示中西醫(yī)結(jié)合治療原發(fā)性肝癌可以改善或提高患者的生活質(zhì)量。 5 TACE+中藥組AFP值下降顯著，與單純TACE組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示化療介入配合清肝化瘀口服液可以較好地降低血中AFP水平。 6 從化療的不良反應(yīng)如肝功能損害出現(xiàn)的情況看，TACE+中藥組低于單純TACE治療組，說(shuō)明清肝化瘀口服液輔助西醫(yī)化療介入治療原發(fā)性肝癌在減輕化療毒副作