運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)研究狼瘡性早發(fā)動脈粥樣硬化患者血清生物標(biāo)志物.pdf

1、【目的】
　　分析系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者的臨床特點(diǎn),并評價SLE患者動脈粥樣硬化(AS)的發(fā)生率、傳統(tǒng)及非傳統(tǒng)危險因素對AS發(fā)生的影響;最后運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩查SLE早發(fā)AS患者血清中的特異性蛋白標(biāo)志物,探索診斷SLE早發(fā)AS的生物學(xué)標(biāo)志,以及SLE的AS發(fā)病機(jī)制。
　　【方法】
　　1、選擇92例確診SLE的無臨床心血管疾病史的患者作為研究對象。頸動脈超聲檢測其頸動脈內(nèi)中膜厚度(cIMT)及觀察斑塊發(fā)生情況,

2、將cIMT≥0.9mm定義為內(nèi)膜增厚;局部IMT>1.5mm或比鄰近內(nèi)膜厚0.5mm、或大于等于鄰近部位IMT的1.5倍定義為斑塊形成。將內(nèi)膜增厚和(或)有斑塊形成的SLE患者納入AS組,而將無內(nèi)膜增厚且無斑塊形成的納入SLE組,并對SLE患者的臨床特點(diǎn)進(jìn)行回顧性分析,對SLE兩組間的傳統(tǒng)心血管危險因素、非傳統(tǒng)危險因素(即SLE特異性指標(biāo))等進(jìn)行單因素比較及Logistic回歸分析。
　　2、剔除高血壓、冠心病家族史、糖尿病、絕經(jīng)

3、、吸煙等傳統(tǒng)心血管危險因素、甲狀腺疾病疾病、其他結(jié)締組織病等因素后,將SLE并AS組中的病例納入陽性組,SLE無AS組(陰性組)及健康對照組年齡、性別匹配后,選取與陽性組相同的病例數(shù)進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析。三組血清池經(jīng)第一相等電聚焦電泳及第二相SDS-PAGE,獲得光密度差異(ratio)>2且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(anova≤0.05)的差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn),MALDI-TOF質(zhì)譜分析并與SwissProt數(shù)據(jù)庫進(jìn)行匹配鑒定。
　　【結(jié)

4、果】
　　1、92例SLE患者中女88例,男4例,平均年齡為(35±11)歲;cIMT0.4~1.7mm,平均(0.67±0.24)mm,其中有22例存在頸動脈內(nèi)膜增厚(23.9％),3例有動脈粥樣硬化斑塊形成(3.26%),23(25%)例有頸動脈內(nèi)膜增厚和(或)斑塊形成。
　　2、對SLE中的AS組及SLE組進(jìn)行單因素比較可發(fā)現(xiàn)兩組在年齡(P=0.004)、*基金項目:泉州市科技計劃項目及福建醫(yī)大重點(diǎn)項目及校重點(diǎn)培育學(xué)科

5、計費(fèi)資助性別(P=0.047)、絕經(jīng)(P=0.022)、高血壓(P=0.016)、血尿酸值(P=0.01)、高敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)(P=0.018)等傳統(tǒng)心血管危險因素差別具統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);而在體重指數(shù)、冠心病家族史、糖尿病、吸煙、血脂指標(biāo)等其他傳統(tǒng)危險因素上差別不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同時應(yīng)用Framingham危險評分評估兩組間的10年心血管風(fēng)險,兩組間無明顯差異(P>0.05)。兩組間在心臟損害(P=0

6、.008)、aCLIgG(P=0.018)具顯著差異;而在病程、起病年齡、疾病活動度評分(SLEDAI-2000)、損傷指數(shù)(SLICC)、狼瘡腎、神經(jīng)精神狼瘡、補(bǔ)體C3、C4、ESR、累積激素用量及免疫抑制劑的使用等SLE疾病特異性指標(biāo)差別均不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。經(jīng)Logisitic回歸分析,年齡增大(P=0.001,OR值=1.096)和血尿酸水平(P=0.01,OR值=1.007)是SLE早發(fā)動脈粥樣硬化的獨(dú)立預(yù)測指標(biāo)

7、。
　　3、實驗入組的陽性組(6例)、陰性組(6例)及健康對照組(6例)年齡、性別、血尿酸水平、血脂代謝指標(biāo)等傳統(tǒng)危險因素差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。陽性組與陰性組相比,二者在病程、起病年齡、SLEDAI-2000、SLICC、臟器受累情況、抗體指標(biāo)、炎癥性指標(biāo)、臨床用藥等非傳統(tǒng)危險因素?zé)o明顯差異(P>0.05)。通過凝膠分析,共發(fā)現(xiàn)24個差異蛋白質(zhì)點(diǎn),挖取10個蛋白質(zhì)點(diǎn)行MALDI-TOF-MS分析,并與SwissProt

8、數(shù)據(jù)庫匹配,成功鑒定差異蛋白質(zhì)為β2糖蛋白Ⅰ(β2-GPⅠ)、結(jié)合珠蛋白(HP)、結(jié)合珠蛋白相關(guān)蛋白(HPR)、Igα-1鏈C區(qū)、Igα-2鏈C區(qū)、鋅α-2糖蛋白(ZAG)、維生素D連接蛋白(VDBP)及補(bǔ)體C3。
　　【結(jié)論】
　　1、SLE動脈粥樣硬化具有早發(fā)趨勢,其為傳統(tǒng)危險因素及SLE疾病本身共同作用的結(jié)果。年齡增大及血尿酸值的增加為SLE早發(fā)AS的危險因素。
　　2、蛋白質(zhì)β2-GP1、HP、HPR、Igα-