狼瘡腎炎患者血清定量蛋白質組學研究.pdf

1、目的：利用同位素標記相對和絕對定量（iTRAQ）技術結合2維液相色譜-串聯(lián)質譜（2D-LC-MS/MS）技術篩選狼瘡腎炎（Lupus Nephritis，LN）和系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）非腎炎患者患者血清差異表達蛋白。為LN的早期診斷以及病情監(jiān)控，從血清定量蛋白質組學的方向提供新的角度和思路。
　　方法：采用LN患者和SLE非腎炎患者血清標本作為研究對象，并以健康人群血清為對照。利用安捷倫多重親和排除系統(tǒng)(MARS)分別去除各組血

2、清中的14種高豐度蛋白，并對低豐度蛋白進行超濾濃縮，分別標記為：①系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎炎組（LN-low）；②SLE非腎炎組（SLE-low）；③健康對照組（N-low）。運用iTRAQ技術構建SLE非腎炎患者和LN患者在疾病不同階段的差異蛋白表達譜，并將所有的差異表達蛋白進行Gene Ontology(簡稱GO)分類和信號通路分析（IPA）；隨后用免疫印跡法（WB）對差異蛋白--載脂蛋白B（APOB）、補體C1q子組件單元C(C，C1QC

3、)和血清淀粉樣蛋白A1(SAA1)進行蛋白水平的鑒定；最后使用SAA1（Human）ELISA Kit測定SAA1在LN、SLE非腎炎組和健康對照組血清樣本中的濃度，并用SPSS進行統(tǒng)計學分析。
　　結果：⑴用SDS-PAGE電泳來驗證待測血清高豐度蛋白的去除效率,結果顯示：可見的蛋白條增多，一些原本未見的低豐度蛋白條帶顯現(xiàn)出來；使用Quantity One軟件來做進一步的分析比較，98％以上的高豐度蛋白已被去除。⑵經iTRAQ聯(lián)

4、合2D-LC-MS/MS分析，共鑒定出302個非冗余蛋白(95%的可信區(qū)間)。通過設置差異蛋白的篩選標準：Cut-off值為ProtScore（unused）>1.5，且P<0.05，Ratio>1.2（上調）或Ratio<0.8（下調）。得到243個差異蛋白，其中LN組與健康對照組比較，有235個差異蛋白（上調蛋白233個，下調蛋白2個）；SLE非腎炎組與健康對照組比較，有243個差異蛋白（上調蛋白3個，下調蛋白240個）；LN組與S

5、LE非腎炎組比較，有243個差異蛋白，且全部是上調蛋白。⑶生物信息分析可知，差異蛋白主要位于細胞外，發(fā)揮炎癥反應或者急性反應的生物學作用；在IPA分析上差異蛋白的信號途徑主要有LXR/RXR激活、FXR/RXR激活以及補體系統(tǒng)等。用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC曲線)分析血清SAA1在SLE非腎炎和LN的表達情況，其曲線下面積（area under the RO

6、C curve,記為AUC）診斷LN為0.843，P=0.001，當SAA1的Cut-off值為1.555μg/mL時，靈敏度為70.5%，特異度為85.7%。
　　結論：①經iTRAQ結合2D-LC-MS/MS技術分析，LN和SLE非腎炎之間存在243個的差異表達蛋白，且差異蛋白SAA1可能是診斷LN的潛在分子標志物。②SLE與LN的發(fā)生發(fā)展涉及機體多條作用通路，如免疫異常、機體急性反應以及血脂異常等。炎性反應可能是促進SLE與