干擾EphA3的慢病毒lentivirus-1504的構(gòu)建及其對(duì)肝癌細(xì)胞7402的抑制作用研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:構(gòu)建攜帶干擾癌基因EphA3的小干擾RNA慢病毒載體，并研究其對(duì)肝癌細(xì)胞7402的生長(zhǎng)和遷徙的影響。
　　方法:構(gòu)建攜帶EphA3小干擾RNA的慢病毒載體質(zhì)粒并將其與外源EphA3表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至人胚腎細(xì)胞293T中，Western印跡檢測(cè)其干擾EphA3蛋白表達(dá)的效果。將pSIH-H1-ShRNA-1504及空載體分別與3種包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，包裝成慢病毒lentivirus-1504及對(duì)照慢病毒。將所獲慢病毒分別

2、感染肝癌細(xì)胞7402，并加入 puromycin(嘌呤霉素)篩選，1周后將細(xì)胞收集。Western印跡檢測(cè) EphA3蛋白的表達(dá)水平，然后分別應(yīng)用MTT實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)以及劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲低EphA3對(duì)肝癌細(xì)胞增殖能力、存活能力，惡性程度和遷移能力的影響。
　　結(jié)果:lentivirus-1504抑制了7402細(xì)胞EphA3的表達(dá)，敲低EphA3后抑制了7402細(xì)胞的增殖能力、存活能力、惡性程度和遷移能力。

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