非小細胞肺癌患者尿中exosomes蛋白質(zhì)組的差異表達分析.pdf

1、目的:尿是除血漿之外的另一種尋找潛在疾病生物標志物的重要生物材料,尿的非侵入式取樣方式和收集樣本量大的優(yōu)點,使尿蛋白質(zhì)組學(xué)(urinary proteomics)的研究日益增多。而exosome作為尿中的一種特別的小體,其組成成分和功能的研究可能對某些疾病的發(fā)生、診斷、預(yù)防和治療有很大的意義,所以本研究分析了正常人和非小細胞肺癌患者尿中的exosomes差異蛋白質(zhì)組,希望為非小細胞肺癌的預(yù)防、診斷和治療提供潛在的生物標志物的候選分子。<

2、br>　　 方法:本研究以200000×g超高速離心法分離正常人和非小細胞肺癌(NSCLC)患者尿的exosomes,運用1D SDS-PAGE對exosomes蛋白質(zhì)組進行分組,然后運用分析軟件Quantity One對正常人和非小細胞肺癌exosomes的蛋白質(zhì)組進行篩選,選出差異蛋白質(zhì)后,經(jīng)過脫色、還原、烷基化、酶解后用HPLC-CHIP-MS/MS對蛋白質(zhì)進行鑒定,所得的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進入UniProtKB/SWISS-PORT數(shù)據(jù)

3、庫,搜索得到相關(guān)蛋白質(zhì)。
　　 結(jié)果:正常組和疾病組患者尿exosomes蛋白質(zhì)組的差異主要出現(xiàn)在90kDa、66kDa和31kDa～20kDa條帶。從電泳膠上切取正常組和疾病組的31kDa～20kDa條帶做質(zhì)譜分析,得到24種蛋白質(zhì),其中在NSCLC患者尿exosomes中發(fā)現(xiàn)了8種差異表達蛋白,包括免疫球蛋白K的三個片段、兩種Ras相關(guān)蛋白、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶A2、血清淀粉樣P成分前體和磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白1。
　　

4、討論:正常組和疾病組患者尿exosomes蛋白質(zhì)組的差異主要出現(xiàn)在90kDa、66kDa和31kDa～20kDa條帶。分子量約為90kDa的條帶為Tamm-Horsfall蛋白(THP)；而由于血漿中大于60kDa的蛋白不可能通過腎小球濾過作用進入尿液,因此尿中出現(xiàn)的大于60kDa的蛋白應(yīng)該是由腎臟上皮細胞所分泌的。因此,只有31kDa～20kDa的條帶來源于血漿,所以選取此條帶來做蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析。在NSCLC患者尿exosomes中通

5、過UniProtKB/SWISS-PORT數(shù)據(jù)庫搜索鑒定了發(fā)現(xiàn)了8種差異表達蛋白,與免疫相關(guān)的免疫球蛋白K的三個片段；兩種Ras相關(guān)蛋白,Ras基因家族突變是人類腫瘤最常見的癌基因事件之一,并認為是腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的一個共同通路；谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶A2,谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶表型的變化在多種腫瘤中都有發(fā)現(xiàn)；血清淀粉樣P成分前體,已有研究發(fā)現(xiàn)血清淀粉樣A成分可作為判斷肺癌病理發(fā)展進程診斷指標；磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白1(PEBP1),PEBP為絲氨酸