肺癌細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院碩士學(xué)位論文肺癌細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法的建立與應(yīng)用姓名：李蕾申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：藥物分析學(xué)指導(dǎo)教師：錢小紅20030630摘要分離效果明顯提高，利用透析袋所獲得的透析效果明顯好于透析管。3對(duì)蛋白質(zhì)的膠上酶切方法進(jìn)行了考察，通過對(duì)sDs—PAGE分離膠上蛋白質(zhì)進(jìn)行還原、烷基化等處理，改變酶切條件，得到一種適用于sDs，PAGE分離蛋白質(zhì)的酶切方法。4應(yīng)用SDs—PAGE

2、與MALDI—TOF—MS聯(lián)用的方法，得到了一個(gè)在肺癌中高表達(dá)的蛋白質(zhì)MMP1，同時(shí)，臨床免疫組化實(shí)驗(yàn)證明MMP一1定位于細(xì)胞漿，在肺癌組織高表達(dá)。5應(yīng)用SDS—PAGE與nanoLC—ESI—MS—MS聯(lián)用方法分析成對(duì)臨床病人的樣品，從腫瘤細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基中鑒定出127個(gè)分泌蛋白質(zhì)，正常細(xì)胞培養(yǎng)基中鑒定出113個(gè)蛋白質(zhì)；腫瘤培養(yǎng)基內(nèi)新發(fā)現(xiàn)的分泌蛋白質(zhì)為110個(gè)，正常細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)新發(fā)現(xiàn)的分泌蛋白質(zhì)為105個(gè)，僅在腫瘤細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基中發(fā)

3、現(xiàn)的蛋白質(zhì)為42個(gè)，僅從正常支氣管上皮細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)為35個(gè)。6對(duì)鑒定的分泌蛋白質(zhì)做了臨床免疫組化與wjst鋤blotting分析。文獻(xiàn)調(diào)研表明，其中大部分分泌蛋白與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，如：nm23一H1在人肺癌中呈高表達(dá)，和腫瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)；多篇文獻(xiàn)報(bào)道，14—3～3和肺癌發(fā)生也有相關(guān)性，有可能作為潛在的診斷標(biāo)志物之一。7初步建立了肺癌組織細(xì)胞分泌蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，包含腫瘤細(xì)胞表達(dá)蛋白質(zhì)177個(gè)，正常上皮細(xì)胞表達(dá)蛋白