石榴籽油抑制乳腺癌細胞惡性生物學(xué)行為的研究.pdf

1、全球乳腺癌發(fā)病率自20世紀70年代末開始一直呈上升趨勢。由于疾病的惡性程度高，嚴重威脅女性的健康。乳腺癌已成為當(dāng)前社會的重大公共衛(wèi)生問題。在以往的食品資源開發(fā)和研究中，由于對石榴籽的認識不足，其很少能被充分利用，近年來隨著人們對石榴籽的研究一步步的深入，發(fā)現(xiàn)石榴籽油的一些功能性成分能夠抑制乳腺癌細胞的增殖，抑制瘤體的形成。
　　目的：
　　對比分析石榴籽油和其他常見油種的脂肪酸組成，找出石榴籽油可能性的功能性脂肪酸。在細胞水

2、平上通過細胞增殖抑制實驗、凋亡實驗和遷移侵襲實驗，研究石榴籽油對乳腺癌細胞系惡性生物學(xué)行為的抑制作用，初步探討石榴籽油抑制乳腺癌細胞惡性生物學(xué)行為可能的機制，提出可能性的信號通路和靶分子。
　　方法：
　　使用氣相色譜分析儀進行石榴籽油和其他常見油種脂肪酸組成的分析。使用MTT方法，對MCF-7/MDA-MB-231乳腺癌細胞進行不同濃度的石榴籽油不同時間段的干預(yù)，分析石榴籽油對乳腺癌細胞增殖活性的抑制情況。并采用流式細胞術(shù)

3、分別對高、低濃度石榴籽油干預(yù)后的乳腺癌細胞進行凋亡程度的檢測。在光學(xué)顯微鏡下拍照觀察石榴籽油干預(yù)乳腺癌細胞后細胞形態(tài)學(xué)的改變。之后使用Western blot方法對不同濃度石榴籽油干預(yù)不同時間后MCF-7/MDA-MB-231細胞中的Cox-2、Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53等相關(guān)增殖凋亡蛋白的表達進行檢測。采用劃痕和transwell實驗來觀察不同濃度石榴籽油干預(yù)MCF-7/MDA-MB-231細胞（24、48、72

4、h）后，細胞的遷移率和穿過 Matrigel膠基底膜的細胞個數(shù)的改變。對石榴籽油干預(yù)后的乳腺癌細胞，使用ELISA方法對金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9的表達情況進行檢測，并用細胞免疫熒光技術(shù)檢測VEGF的表達水平。
　　結(jié)果：
　　1.石榴籽油中的脂肪酸主要由石榴酸、酮酸、亞油酸、油酸、棕櫚酸、硬脂酸構(gòu)成，其中石榴酸占主要成分，約為74.41％。
　　2.與其他的常見油種脂肪酸組成相比，石榴籽油具有其他油種不具有的石

5、榴酸、酮酸，且棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸含量的所占比例均比其他油種低。
　　3.高濃度的石榴籽油干預(yù)MCF-7/MDA-MB-231細胞后，MCF-7細胞形態(tài)由團團緊縮狀變?yōu)榉稚顟B(tài)，MDA-MB-231細胞由長梭形狀態(tài)變?yōu)閳A潤的鋪路石狀。兩種細胞均出現(xiàn)空泡，核溶解的狀態(tài)。
　　4.石榴籽油干預(yù)MCF-7/MDA-MB-231后，不同濃度的石榴籽油對細胞的增殖抑制作用，與陰性對照組對比具有顯著性差異（p<0.05），且呈現(xiàn)

6、時間-濃度依賴性。
　　5. MCF-7/MDA-MB-231細胞經(jīng)不同濃度的石榴籽油干預(yù)96h后，能不同程度的使細胞發(fā)生凋亡（早期凋亡+晚期凋亡+死細胞），與陰性對照組相比有顯著性差異（p<0.05），且呈現(xiàn)濃度依賴性。
　　6.石榴籽油可顯著下調(diào)乳腺癌細胞中Cox-2、Bcl-2的表達水平，上調(diào)Bax、Caspase-3（cleaved）的表達水平，上調(diào)MCF-7中p53的表達水平或下調(diào)在MDA-MB-231中的表達水平

7、。
　　7.石榴籽油干預(yù)MCF-7/MDA-MB-231細胞后，同一時間點，石榴籽油濃度與細胞遷移率成反相關(guān)，作用72 h后，分別與對照組比較，細胞遷移率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。
　　8.石榴籽油干預(yù)MCF-7/MDA-MB-231細胞后，在同一時間點，石榴籽油濃度與穿過Matrigel膠基底膜的細胞個數(shù)成反相關(guān)，作用72 h后，分別與對照組比較，穿過Matrigel膠基底膜的細胞個數(shù)的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0

8、.05）。
　　9. MCF-7/MDA-MB-231細胞在石榴籽油72h干預(yù)后，能夠顯著下調(diào)MMP-2在細胞中的表達水平，石榴籽油濃度與MMP-2的表達量成反相關(guān)，與對照組相比，具有顯著性差異（p<0.05）。
　　10.經(jīng)過石榴籽油72 h干預(yù)的 MCF-7/MDA-MB-231細胞，石榴籽油可以明顯降低VEGF的表達水平，石榴籽油濃度與VEGF的表達水平成反相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.石榴酸是石榴籽油主要的

9、脂肪酸組成成分，石榴酸可能是石榴籽油抑制乳腺癌細胞惡性生物學(xué)行為的功能性脂肪酸。
　　2.石榴籽油能夠顯著抑制乳腺癌細胞的增殖活性，并能夠誘導(dǎo)其凋亡。
　　3.石榴籽油抑制乳腺癌細胞增殖活性，促進其凋亡的作用可能是通過調(diào)節(jié)細胞中Cox-2、Bcl-2、Bax、Caspase-3（cleaved）以及p53的表達水平實現(xiàn)的。
　　4.石榴籽油可以顯著抑制乳腺癌細胞遷移和侵襲的惡性生物學(xué)行為。
　　5.下調(diào)MMP-2