AKT3在乳腺癌組織中的表達及對乳腺癌細胞生物學行為影響的研究.pdf

1、乳腺癌是世界各地女性中最為常見的惡性腫瘤，也是導致女性死亡的主要原因之一。在查閱大量文獻和本室原有工作的基礎(chǔ)上，本研究應(yīng)用免疫組化、腺病毒轉(zhuǎn)導、Western blot、DNA Ladder測定等技術(shù)，探討蛋白激酶Bγ(AKT3)在乳腺浸潤型導管癌中的表達及其對乳腺浸潤型導管癌BT474細胞生物學行為的影響，旨在為闡明其作用及可能的作用機制，并為發(fā)現(xiàn)可能的藥物治療作用靶點奠定基礎(chǔ)。
　　本研究第一部分首先應(yīng)用免疫組化方法測定AKT

2、3在80例乳腺浸潤型導管癌及與其配對的相同患者的癌旁組織樣本中的表達、并對結(jié)果進行統(tǒng)計學分析、判斷其在癌及癌旁組織中的表達與患者臨床病理特性的關(guān)系。結(jié)果表明：在80例乳腺浸潤型導管癌樣本中， AKT3過表達的共57例，過表達率為71.2％，秩和檢驗(Wilcoxon)結(jié)果顯示：AKT3在癌與癌旁組織中的表達差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。AKT3在乳腺浸潤型導管中的過表達與患者的年齡、腫瘤大小無關(guān)，但與腫瘤TN M分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密

3、切相關(guān)。免疫組化結(jié)果表明：AKT3的過表達與乳腺浸潤型導管癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
　　以第一部分的結(jié)果為依據(jù)，本研究的第二、三部分著眼于探討AK T3對乳腺浸潤型導管癌細胞生物學行為的影響。
　　本研究第二部分設(shè)計引物，應(yīng)用RT-PCR法從流產(chǎn)胎兒腦組織總RNA中擴增AKT3基因cDNA，以XhoI及BglII酶切位點克隆入腺病毒pShuttle-IRES-hrGFP-1穿梭質(zhì)粒中，測序鑒定后與骨架載體 PAdeasy-1同源重

4、組，以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染293A細胞，在293A細胞中包裝和擴增并進行病毒滴度的測定；再用Akt3重組腺病毒顆粒轉(zhuǎn)導乳腺浸潤型導管癌BT474細胞株，Western-blot和RT-PCR檢測并篩選出AKT3蛋白或mRNA表達最高的Akt3腺病毒及細胞，結(jié)果表明成功地構(gòu)建pAd-AKT3腺病毒表達載體、成功地獲得了AKT3過表達的BT474細胞株，保證了后續(xù)的研究。
　　本研究第三部分主要針對AKT3對乳腺浸潤型導管癌細胞生物學行為的影響

5、進行初步的探討。通過應(yīng)用MTT試驗測定細胞增殖、DNA Ladder方法測定細胞凋亡、軟瓊脂集落形成實驗測定細胞致瘤性等生物學行為，分析上述AKT3過表達的乳腺浸潤型導管癌細胞株的生物學行為的改變(以轉(zhuǎn)導空載體腺病毒顆粒為對照)，初步判斷AK T3對乳腺浸潤型導管癌細胞生物學行為的影響。結(jié)果表明：乳腺浸潤型導管癌BT474細胞過表達AKT3后，其細胞增殖增強，凋亡較少，致瘤性增加，統(tǒng)計學結(jié)果表明與轉(zhuǎn)導空載體的對照比較，差異具有統(tǒng)計學意義