MiRNA-362-5p對乳腺癌惡性生物學行為的影響.pdf

1、乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一。流行病學調查資料顯示,在美國其發(fā)病率位居第二位,而其死亡率已經(jīng)位居癌癥相關死亡率的第一位。在我國,乳腺癌的發(fā)病率雖然較低,但在一些大中城市,如北京、上海,發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。乳腺癌的發(fā)病原因至今仍不明確,目前認為乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與多種因素有關,例如遺傳因素、內分泌因素、乳腺良性病變惡變等。盡管目前治療手段多樣,傳統(tǒng)手術和化療等治療措施首次療效較好,但由于乳腺癌具有易復發(fā)和早期轉移等惡性生物學行為特征

2、常導致治療失敗,因此深入研究乳腺癌惡性生物學行為的形成機制變得尤為重要。
　　由19-25個核苷酸組成的、非編碼的單鏈RNA被稱為微小核糖核酸(microRNA,miRNA,miR)。這類小RNA在表達上具有組織和時間的特異性,是調節(jié)其他功能基因表達的重要調控分子,在生物的生長發(fā)育過程中發(fā)揮著重要作用。miRNA主要通過與靶基因3’非編碼區(qū)(UTR)完全互補或者部分互補結合從而使靶基因降解或翻譯抑制,從而在轉錄后水平調節(jié)基因的表達

3、。研究表明,多種的microRNA參與腫瘤的惡性轉變過程,如惡性增殖,復發(fā)轉移,凋亡抑制等。有研究報道,利用microRNA抑制劑降低乳腺癌細胞中高表達的miRNA-21后,抑制了乳腺癌細胞的增殖、遷移及腫瘤的生長。這一發(fā)現(xiàn)為乳腺癌的基因治療提供的一個新的方向。本實驗重點探討一個新的miRNA-362-5p乳腺癌惡性生物學行為的影響,以及相關的作用機制。
　　我們在實驗當中首先檢測了乳腺癌細胞MCF-7、MB231與正常細胞CCD

4、-1095SK中miRNA-362-5p的表達差異,發(fā)現(xiàn)miRNA-362-5p在乳腺癌細胞中呈現(xiàn)高表達。為了探討miRNA-362-5p的高表達是否影響乳腺癌的生物學行為,我們將miRNA-362-5p的抑制劑轉染MCF-7細胞,MTT法檢測細胞增殖結果顯示,當MCF-7細胞中miRNA-362-5p的表達被抑制后,細胞的增殖能力受到了明顯抑制。進一步通過流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)這是由于轉染后MCF-7細胞被限制在G0期向S期轉化的進程中,

5、而G2/M期未受明顯影響。隨后,我們通過劃痕實驗及Transwell方法檢測細胞遷移,結果顯示實驗組細胞的遷移能力受到了明顯的抑制。Transwell方法檢測侵襲能力同樣表明實驗組細胞的侵襲能力被抑制。為了進一步驗證miRNA-362-5p對腫瘤細胞克隆形成能力的影響,我們運用平板克隆實驗及軟瓊脂實驗檢測結果顯示細胞的克隆形成能力明顯下降,細胞粘附實驗結果顯示實驗組細胞的粘附能力亦受到抑制。有文獻報導指出,miRNA對腫瘤細胞的凋亡亦有

6、影響,因此我們利用順鉑誘導細胞凋亡,通過流式細胞術來檢測其對乳腺癌細胞凋亡能力的影響,結果顯示實驗組的凋亡細胞數(shù)顯著高于對照組,以上這些實驗結果說明miRNA-362-5p的高表達有可能促進了乳腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲,而抑制了其凋亡的發(fā)生。
　　在我們實驗室前期的研究當中發(fā)現(xiàn),在白血病細胞中miRNA-362-5p通過靶向CYLD促進NF-κB信號通路的激活從而促進了白血病細胞的增殖和侵襲,為了驗證在乳腺癌細胞中miRNA-3

7、62-5p是否同樣是通過這一途徑來發(fā)揮作用的,我們將miRNA-362-5p的抑制劑及模擬物分別轉染MCF-7細胞及CCD-1095SK細胞,westernblot檢測CYLD的表達情況及NF-κB信號通路的活化情況,結果顯示在MCF-7細胞中當miRNA-362-5p被抑制后,CYLD的表達得到了恢復而入核的NF-κB則下調,在CCD-1095SK細胞中當miRNA-362-5p的表達恢復以后,CYLD的表達下調而入核的NF-κB則上