Sirt1通過PI3K-Akt-mTOR信號途徑對鵝肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積的影響研究.pdf

1、機體內(nèi)脂質(zhì)代謝平衡被破壞，就會引起大量的的脂質(zhì)在肝臟內(nèi)沉積形成脂肪肝。Sirt1基因在脂質(zhì)代謝中起著重要的調(diào)控作用，但其具體調(diào)控機制還不明確;PI3K-Akt-mTOR信號通路參與調(diào)控糖脂代謝等新陳代謝活動，而其具體機理也是目前的研究熱點之一;兩者在脂質(zhì)調(diào)控中是否存在相互作用，目前鮮見報道，因此本試驗通過不同濃度的尼克酰胺(Nicotinamide)處理鵝原代肝細(xì)胞，檢測Sirt1和脂質(zhì)代謝關(guān)鍵因子的表達變化;然后在選出的最佳尼克酰胺濃

2、度處理鵝原代肝細(xì)胞的基礎(chǔ)上，添加不同的PI3K-Akt-mTOR信號通路抑制劑LY294002、NVP-BEZ235、雷帕霉素(Rapamycin)處理培養(yǎng)，檢測脂肪酸合成與氧化、VLDL的生成和分泌、PI3K-Akt-mTOR信號通路關(guān)鍵因子和Sirt1本身的表達變化，分析Sirt1通過PI3K-Akt-mTOR信號途徑調(diào)控脂質(zhì)代謝的機理。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　1.不同濃度尼克酰胺處理鵝原代肝細(xì)胞，Sirt1的mR

3、NA表達水平和蛋白濃度隨著尼克酰胺濃度升高而降低;尼克酰胺處理濃度為100μmol/L時，Sirt1蛋白濃度為對照組的51.50％;
　　2.不同濃度尼克酰胺處理肝細(xì)胞，促進脂肪酸合成關(guān)鍵因子SREBP1、FAS、ACCα表達(P＜0.05)，抑制脂肪酸氧化關(guān)鍵因子PPARα、PPARγ、ACOX1、CPT1的表達(P＜0.05)，下調(diào)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運關(guān)鍵因子FoxO1、MTTP、DGAT1、DGAT2的表達水平(P＜0.05);尼克酰胺

4、處理也能增加胞內(nèi)TG含量(P＜0.05)，減少VLDL和胞外TG含量(P＜0.05)，誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)脂滴增大增多、脂質(zhì)含量上升(P＜0.05)，脂質(zhì)沉積增加;
　　3.鵝肝細(xì)胞添加100μmol/L的尼克酰胺處理后，PI3K-Akt-mTOR信號通路關(guān)鍵因子PI3K盼表達被抑制(P＜0.05)，mTOR表達被上調(diào)(P＜0.05)，Akt1表達無顯著性變化(P＞0.05);再添加通路抑制劑LY294002時，mTOR、Akt1表達被下

5、調(diào)，PI3K表達與尼克酰胺單獨處理無顯著性差異;而當(dāng)再添加通路抑制劑Rapamycin時，mTOR、Akt表達降低，而PI3K表達較尼克酰胺單獨處理顯著升高;當(dāng)在添加NVP-BEZ235雙重抑制信號通路時，Akt表達與對照組無顯著性差異，mTOR被下調(diào)，PI3K表達較尼克酰胺單獨處理無顯著性差異。再添加NVP-BEZ235抑制劑時，Sirt1表達與尼克酰胺單獨處理無顯著性差異，而當(dāng)再添加另外兩種通路抑制劑時，Sirt1表達顯著降低(P＜

6、0.05);
　　4.最佳濃度100μmol/L的尼克酰胺處理鵝肝細(xì)胞，抑制Sirt1表達，導(dǎo)致脂肪酸合成關(guān)鍵因子表達增加;而添加通路抑制劑LY29002、NVP-BEZ235、Rapamycin時，脂肪酸合成關(guān)鍵因子表達被顯著下調(diào)(P＜0.05)，而且NVP-BEZ235的效果最強;
　　5.通路抑制劑LY294002、NVP-BEZ235和尼克酰胺共處理鵝肝細(xì)胞，能減弱尼克酰胺單獨處理對脂肪酸氧化關(guān)鍵因子的抑制效果，而且

7、添加NVP-BEZ235的這種減弱效果更強;但是脂肪酸氧化關(guān)鍵因子CPT1蛋白表達上卻是添加LY294002時最高(P＜0.05);
　　6.脂質(zhì)轉(zhuǎn)運關(guān)鍵因子能被尼克酰胺所抑制，當(dāng)再添加抑制劑LY294002、NVP-BEZ235和Rapamycin時，脂質(zhì)轉(zhuǎn)運關(guān)鍵因子表達被進一步下調(diào);但是，DGAT1的mRNA表達水平在添加LY294002時被顯著上調(diào)了(P＜0.05);同樣FoxO1的mRNA表達水平和蛋白濃度在添加NVP-B

8、EZ235處理時顯著升高(P＜0.05);
　　7.100μmol/L的尼克酰胺能顯著提高肝細(xì)胞活性，增加肝細(xì)胞內(nèi)TG等脂質(zhì)的含量，減少VLDL的生成分泌和胞外TG含量;當(dāng)添加通路抑制劑LY294002、NVP-BEZ235時，細(xì)胞活性變化不大，肝細(xì)胞內(nèi)TG等脂質(zhì)含量顯著降低(P＜0.05)，VLDL和胞外TG含量高于尼克酰胺單獨處理組;而添加通路抑制劑Rapamycin時，VLDL和胞外TG含量最低;油紅O染色發(fā)現(xiàn)，添加通路抑制