羅希土堿通過PI3K-mTOR-PPARγ途徑降低巨噬細胞LPL表達及脂質(zhì)蓄積.pdf

1、[目的]動脈粥樣硬化（atherosclerosis，As）發(fā)病機制復(fù)雜，已成為我國首位人口死亡原因之一。動脈壁脂質(zhì)沉積、泡沫細胞形成等，在As的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）是水解血漿中乳糜微粒（chylomicron，CM）、極低密度脂蛋白（very low density lipoprotein,VLDL）等脂蛋白中甘油三酯的關(guān)鍵酶，在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮著重要作用。動脈壁中巨噬細胞分

2、泌的LPL具有促進巨噬細胞脂質(zhì)蓄積的作用，導(dǎo)致泡沫細胞的形成及動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。羅希土堿（rohitukine，RH），是一種色原酮類生物堿，具有抗癌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)的等生物活性，最新研究顯示，其具有抑制脂肪細胞分化的作用。本研究目的在于探討羅希土堿對巨噬細胞LPL的表達及細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積的影響。
　　[方法]RAW264.7巨噬細胞經(jīng)不同濃度（0,5,10,20 uM）羅希土堿處24h及20uM羅希土堿處理不同時間（0,12

3、,24,48h）后，Western blot檢測LPL蛋白水平，RT-PCR檢測LPL mRNA水平，試劑盒檢測LPL活性。20uM羅希土堿與50mg/ml LDL共孵育RAW264.7巨噬細胞24h后，酶法定量檢測細胞內(nèi)甘油三酯(triglyceride，TG)及總膽固醇（total cholesterol,TC）水平，油紅O染色法檢測巨噬細胞脂滴形成情況。20uM羅希土堿處理RAW264.7巨噬細胞24h后，Western blot

4、（WB）檢測磷脂酰肌醇-3激酶磷酸化水平（p-PI3K）、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白磷酸化水平（p-mTOR）、PPARγ蛋白水平。外源性加入PPARγ激動劑后，檢測LPL蛋白水平、LPL mRNA水平及LPL活性。外源性加入mTOR激動劑后，檢測LPL、PPARγ蛋白水平、LPL mRNA水平及LPL活性。外源性加入PI3K激動劑后，檢測LPL、p-mTOR、PPARγ蛋白水平、LPL mRNA水平及LPL活性。免疫共沉淀檢測巨噬細胞低密

5、度脂蛋白受體（LDLR）與LPL結(jié)合情況。
　　[結(jié)果]羅希土堿呈劑量和時間依賴性下調(diào) RAW264.7巨噬細胞LPL的表達（蛋白及mRNA水平）及活性，進而減少巨噬細胞LPL介導(dǎo)的細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積，細胞內(nèi)脂滴明顯減少，TG及TC含量下降。進一步實驗顯示，羅希土堿可抑制p-PI3K、p-mTOR及PPARγ的表達。外源性分別加入p-PI3K、p-mTOR及PPARγ的激動劑，羅希土堿抑制巨噬細胞LPL表達及活性的作用均被削減。羅希土