四川食用菌病毒dsRNA的檢測(cè)和對(duì)多菌靈的敏感性測(cè)定.pdf

1、食用菌病毒是真菌病毒的一部分，絕大部分食用菌病毒的基因組是由dsRNA組成，而且多數(shù)是多節(jié)段的。食用菌病毒具有很強(qiáng)的潛隱性，除雙孢蘑菇病毒病是典型的爆發(fā)性病害外，其它食用菌病毒通常并不引起寄主明顯病征，這為食用菌病毒病害的早期診斷帶來(lái)麻煩，對(duì)生產(chǎn)造成病害隱患。dsRNA技術(shù)是在研究真菌病毒的過(guò)程中發(fā)展起來(lái)的檢測(cè)RNA病毒的技術(shù)，具有準(zhǔn)確、方便和快捷的優(yōu)點(diǎn)，是目前檢測(cè)食用菌病毒最為常用的方法。 多菌靈(Carbendazim)為苯

2、并咪唑類(lèi)廣譜內(nèi)吸性殺菌劑，對(duì)許多真菌(包括子囊菌、半知菌和擔(dān)子菌)有抑制和殺滅作用，食用菌生產(chǎn)上常用來(lái)抑制雜菌生長(zhǎng)，提高菌袋成功率。但是，多菌靈化學(xué)性質(zhì)相當(dāng)穩(wěn)定，殘效期較長(zhǎng)，其對(duì)食品安全性的影響引起了越來(lái)越多人的關(guān)注。為了了解四川省食用菌中dsRNA病毒的攜帶情況，為病毒病害的防治與食用菌脫毒育種提供一定依據(jù)，同時(shí)了解四川省主要栽培的食用菌菌株對(duì)多菌靈的敏感性及多菌靈在子實(shí)體中的殘留，為多菌靈的正確和科學(xué)使用提供參考，我們于2006～2

3、008年從四川省內(nèi)主要的食用菌科研單位和食用菌產(chǎn)區(qū)，通過(guò)征集試管母種和采集子實(shí)體組織分離的方法獲得包括雙孢蘑菇、香菇、平菇、茶樹(shù)菇、雞腿菇和金針菇等主要大面積栽培的食用菌菌株87個(gè)，對(duì)它們進(jìn)行了dsRNA檢測(cè)及陽(yáng)性菌株的高溫、低溫和藥物處理，多菌靈敏感性測(cè)定，同時(shí)選取茶樹(shù)菇進(jìn)行了多菌靈在子實(shí)體中的殘留測(cè)定，從而明確了四川食用菌病毒dsRNA的攜帶情況和對(duì)多菌靈的敏感性及多菌靈在子實(shí)體中的殘留，其結(jié)果如下： 1.對(duì)所采集的87個(gè)食

4、用菌菌株進(jìn)行dsRNA的提取，經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳分析表明：所檢測(cè)的87個(gè)食用菌菌株中，有26個(gè)菌株含有dsRNA，占29.9％。其中：平菇類(lèi)中有16個(gè)，占平菇類(lèi)的38.1％；香菇類(lèi)有9個(gè)，占香菇類(lèi)的81.8％；其它珍稀菌類(lèi)1個(gè)，占11.1％；不同地理來(lái)源和品種的雙胞蘑菇、金針菇、雞腿菇和木耳菌株均未檢測(cè)到dsRNA。 2.平菇、鳳尾菇、秀珍菇、香菇和茶樹(shù)菇dsRNA陽(yáng)性菌株經(jīng)過(guò)高溫、低溫和藥物脫毒處理后，采用dsRNA分析技術(shù)

5、進(jìn)行檢測(cè)，所有菌株電泳圖譜dsRNA條帶均依然存在，表明脫毒難度大。經(jīng)過(guò)高溫、低溫和藥物處理前后在PDA平板上的生長(zhǎng)速度的差異顯著性因處理方法和菌株不同而不同。其中平菇菌株經(jīng)高溫處理前后平均生長(zhǎng)速度有明顯差異：鳳尾菇菌株經(jīng)cycloheximide處理前后生長(zhǎng)速度有明顯差異。其它菌株各處理前后無(wú)明顯變化。 3.對(duì)平菇、香菇、雙孢蘑菇、茶樹(shù)菇、金針菇、雞腿菇、木耳及其它珍稀菌類(lèi)共60個(gè)食用菌菌株進(jìn)行的多菌靈敏感性測(cè)定表明不同品種和

6、類(lèi)別及相同品種不同菌株對(duì)多菌靈具有不同的敏感性，其EC50差異很大。在無(wú)藥平板上，各菌類(lèi)菌絲能夠正常生長(zhǎng)形成菌落，菌絲潔白健壯。在含藥平板上，平菇、雙孢蘑菇、茶樹(shù)菇、雞腿菇和木耳菌絲生長(zhǎng)均受到抑制，隨著藥劑濃度的增加，菌落直徑也逐漸減小。平菇和茶樹(shù)菇菌株對(duì)多菌靈有一定耐受力，EC50分布12.9～37μg/ml之間；雙胞蘑菇和雞腿菇對(duì)多菌靈的耐受力次于平菇，EC50分布3.4～4.07μg/ml之間；木耳菌株對(duì)多菌靈最敏感，EC50分布