食用菌中硒的形態(tài)分析.pdf

1、通過本課題的研究，獲得富硒食用菌子實體栽培的成功經(jīng)驗，并可用于生產(chǎn)實踐，為富硒食用菌的科學化、規(guī)?；⑹袌龌耘嗵峁┛茖W的理論依據(jù)。根據(jù)研究硒在食用菌體內(nèi)的分布、遷移轉(zhuǎn)化規(guī)律以及各種存在形態(tài)，可知通過食用菌為載體能有效地將無機硒轉(zhuǎn)化為人體極易吸收且無毒的有機硒化合物。并對其中的有機硒化合物從分子水平上采用現(xiàn)代HPLC-ICP-MS聯(lián)機技術(shù)進行分離分析，研究其活性機理和生物學功能，實現(xiàn)了從分子生物學角度對新的補硒資源和更有效的生物活性因子

2、進行有益的探索，為研究人類硒源的生物安全性和高效可利用性提供科學的理論依據(jù)。論文具體研究內(nèi)容如下： 第一章緒論 首先介紹了硒的生理生化功能及對人體健康的影響，針對如何科學補硒，介紹了硒的生物有機化和硒源的生物學研究進展，進而對生物體中硒的存在形態(tài)及不同形態(tài)含硒化合物的提取、分離、純化、鑒定、分析方法等內(nèi)容的國內(nèi)外研究現(xiàn)狀進行了綜述，之后關(guān)于硒的生物活性、功效學等方面的應用研究作以介紹。 第二章富硒食用菌的培養(yǎng)及其

3、生物富硒特性的研究 采用250ml搖瓶振蕩培養(yǎng)的方法對蛹蟲草和金針菇菌絲體的富硒特性進行了研究；在此基礎(chǔ)上與當?shù)厥秤镁a(chǎn)基地合作，采用現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)培養(yǎng)了大批富硒蛹蟲草和金針菇子實體，并在生產(chǎn)和實驗過程中對二者的富硒特性進行了系統(tǒng)研究。 第三章食用菌中硒的分析方法研究 采用石英高壓消化罐在較低溫度下進行緩慢樣品消化，減少了消化過程中硒的損失。分別建立了石墨爐原子吸收法和ICP-MS法對食用菌中硒的含量進行測定。

4、 第四章富硒食用菌中硒的分布、賦存形態(tài)及遷移轉(zhuǎn)化規(guī)律的研究 對蛹蟲草和金針菇的富硒能力、富硒倍數(shù)、硒的生物有機化及其體內(nèi)硒的分布轉(zhuǎn)移規(guī)律進行了研究。 第五章富硒食用菌中硒蛋白的形態(tài)分析 采用生化分離技術(shù)對富硒蛹蟲草和金針菇子實體中的硒蛋白以硫酸銨分級沉淀的方式進行分離、純化，對各級鹽析蛋白中含硒量進行測定，結(jié)果表明，蛹蟲草和金針菇可溶性蛋白中硒含量為樣品總硒含量的：22.1％和5.1％。；進一步采用SE-H

5、PLC-ICP-MS聯(lián)機方法對粗分的硒蛋白進行在線分離分析，確定富硒蛹蟲草中至少含有七種硒蛋白，其分子量分布在114.0-1.0kDa之間，其中硒含量較高的是分子量為22.6kDa和1.6kDa的硒蛋白，二者含硒量之和占可溶性硒蛋白中硒含量的86.8％；富硒金針菇中至少含有六種硒蛋白，其分子量分布在74.0-9.0kDa之間，其中硒含量較高的是分子量為34kDa、25kDa和12kDa的硒蛋白，其含硒量之和占可溶性硒蛋白中硒含量的62.

6、6％。研究中發(fā)現(xiàn)無論是富硒蟲草還是金針菇其可溶性的大分子硒蛋白一旦脫離子實體其生物活性很難保持，容易轉(zhuǎn)化成小分子的含硒蛋白、含硒低聚肽和更小的硒代氨基酸等。相對而言以各種小分子形式存在的含硒化合物，如硒代氨基酸等卻能穩(wěn)定存在于所在介質(zhì)中，發(fā)揮其特有的生物活性作用。進一步結(jié)合RP-HPLC-ICP-MS聯(lián)機技術(shù)，對富硒食用菌中可溶性含硒生物分子進行確認。 第六章富硒食用菌中硒多糖的形態(tài)分析 通過對富硒金針菇硒多糖提取條件的

7、優(yōu)化，可得到含硒7.97μg/g的粗硒多糖，對粗硒多糖進一步采用SE-HPLC-ICP-MS聯(lián)機的方法進行在線分離分析，確定富硒金針菇中至少含有三種硒多糖，其分子量分別為4.27kDa、1.868kDa、1.54kDa，含硒量分別占可溶性硒多糖中硒含量的15.05％、48.31％、36.38％。將粗多糖經(jīng)柱層析系統(tǒng)分離純化，所得精多糖進行紅外光譜分析可知富硒金針菇中水溶性硒多糖與普通多糖結(jié)構(gòu)相似，而堿溶性硒多糖中由于硒酸酯的形成改變了原