牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液不同的給藥途徑對大鼠坐骨神經(jīng)損傷后再生與修復(fù)的影響.pdf

1、目的：周圍神經(jīng)卡壓是常見的、多發(fā)性損傷。這種神經(jīng)損傷可造成神經(jīng)功能障礙，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。精湛的顯微外科技術(shù)為卡壓后神經(jīng)的再生與修復(fù)提供良好的基礎(chǔ)。但神經(jīng)卡壓后，如何對其加以保護，最大限度地減輕其繼發(fā)性損害，盡快恢復(fù)其傳導(dǎo)功能，仍是目前尚未解決的難題。近年來國內(nèi)、外做了大量的相關(guān)研究，發(fā)現(xiàn)了一些對卡壓神經(jīng)再生與修復(fù)有促進作用的生物活性物質(zhì)和相關(guān)藥物（如：神經(jīng)營養(yǎng)因子、牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液等），并逐漸成為卡壓后神經(jīng)再生與修復(fù)

2、領(lǐng)域的又一熱點。
　　 牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液（ERSVV）是一種國產(chǎn)的新型生物制劑，是由牛痘病毒疫苗致敏家兔后的皮膚組織提純精制液，具有神經(jīng)修復(fù)、鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)作用。它有肌肉注射、靜脈注射、腹腔注射、神經(jīng)周圍給藥、蛛網(wǎng)膜下腔給藥等多種給藥途徑。但ERSVV直接注入受損神經(jīng)周圍與肌肉注射對卡壓后神經(jīng)再生與修復(fù)有無差別尚未見報道。本實驗采用SD大鼠，參照Bennett and Xie設(shè)計的坐骨神經(jīng)慢性卡壓模型（CCI），探討

3、ERSVV兩種不同的給藥途徑對卡壓后神經(jīng)的再生與修復(fù)的影響。旨在為臨床治療周圍神經(jīng)損傷提供依據(jù)。
　　 方法：雄性SD大鼠80只，體重280±20克，隨機分為4組，每組20只：A組為假手術(shù)組（正常對照組），B組為模型組（卡壓對照組），C組為肌肉注射ERSVV，D組為神經(jīng)周圍給予ERSVV。麻醉成功后，A組僅顯露右側(cè)坐骨神經(jīng)而不卡壓，即閉合切口；B、C、 D組分別于右側(cè)大腿制備CCI模型，并在神經(jīng)管旁置管。每天經(jīng)導(dǎo)管注射注射用水0

4、.2ml，防止導(dǎo)管阻塞。術(shù)后14天大鼠行為反應(yīng)最強烈，更易激惹，取材后鏡下觀察到神經(jīng)水腫、軸突變性、數(shù)目減少、髓鞘崩解（Guilbarld報道該模型建立需要14天），證明CCI模型制備成功。B組14天后繼續(xù)經(jīng)導(dǎo)管注射注射用水0.2ml直至取材.C組在B組的基礎(chǔ)上肌肉注射ERSVV0.2ml，而D組將注射用水改為ERSVV0.2ml直至取材。四組分別于CCI術(shù)后14天、21天、28天測大鼠的坐骨神經(jīng)功能指數(shù)（SFI）。并且在各組中隨機取6

5、只大鼠，麻醉下顯露坐骨神經(jīng)，觀察神經(jīng)的大體變化，測量神經(jīng)傳導(dǎo)速度（NCV）及振幅（APT）并取材，在光鏡和電鏡下觀察坐骨神經(jīng)的超微結(jié)構(gòu)、作圖樣分析計算神經(jīng)軸突數(shù)目和髓鞘厚度，免疫組織化學檢測神經(jīng)生長因子（NGF）。
　　 結(jié)果：
　　 1.大體觀察：CCI大鼠術(shù)后一般狀況良好，體重無明顯減輕，體毛富有光澤，覓食飲水正常?；贾顒訙p少、無力，足爪伸展受限，出現(xiàn)舔足、梳理、搔扒等癥狀，且逐漸加重。開始給藥后，各組大鼠患肢活動

6、逐漸恢復(fù)，癥狀逐漸減輕。在術(shù)后第14天，A組神經(jīng)表面光滑，與周圍組織組無粘連。B、C、D各組神經(jīng)明顯充血、水腫；卡壓段神經(jīng)外膜顏色較紅。按擬定時間隨著藥物的不斷應(yīng)用，在術(shù)后第21、28天B組充血、水腫程度仍較重，C、D兩組充血、水腫明顯減輕，卡壓段神經(jīng)外膜的顏色逐漸變白。而D組的神經(jīng)外膜顏色和水腫程度又比C組輕。
　　 2.坐骨神經(jīng)功能指數(shù)（SFI）：與A組比，B、C、D三組第21、28天SFI明顯降低,與B組比，C、D兩組第2

7、1、28天SFI明顯升高，而D組明顯高于C組。C、D兩組28天時分別與21天、14天時進行組內(nèi)比較升高非常顯著。
　　 3.神經(jīng)電生理指標分析：A組的NCV；AMP在各測試點無明顯的變化。C、D組21、28天時高于B組而低于A組，D組高于C組。組內(nèi)比較：B組升高不明顯差異無統(tǒng)計學意義；C、D兩組28天時明顯優(yōu)于21天時，優(yōu)于14天時更為明顯。
　　 4.軸突計數(shù)和髓鞘厚度：與A組比較，各時間點B、C、D組明顯變小。在第2

8、1、28天時，C、D組的均高于B組，D組高于C組，并且C、D組28天時均高于本組第14、21天時的值。但B組升高不明顯無統(tǒng)計學意義。
　　 5.組織病理學觀察，光鏡下：A組神經(jīng)纖維排列整齊，髓鞘完整。在第14天時B、C、D表現(xiàn)為相似的神經(jīng)大量斷裂，髓鞘脫落神經(jīng)水腫嚴重，神經(jīng)軸突密度減少。B組第28天時，有細小神經(jīng)生長但是沒有髓鞘，C組可以看到髓鞘變厚、數(shù)量增多，D組在28天時有小的并且有薄的神經(jīng)髓鞘的軸突發(fā)芽。電鏡下：A第14天

9、時神經(jīng)的髓鞘、神經(jīng)膜細胞與基底膜結(jié)構(gòu)完整，髓鞘板層清晰可見。B、C、D組髓鞘明顯水腫，線粒體和微絲微管明顯減少，髓鞘部分增生形狀不規(guī)則神經(jīng)髓板水腫。B組第28天時軸突部分斷裂，脊膜消失融合，線粒體空化，板層結(jié)構(gòu)破壞，微絲微管減少，損傷較輕。C組大部分脊膜消失融合，可見微絲微管，損傷較輕，髓鞘變厚，板層變規(guī)則，但D組有髓神經(jīng)纖維的數(shù)量、軸突直徑、髓鞘厚度、軸突內(nèi)線粒體、微絲、微管、數(shù)量等均大于C組。
　　 6.免疫組織化學：A組的

10、NGF不表達或少量表達。而B、C、D組的NGF表達在變性及再生神經(jīng)纖維的軸索和雪旺細胞（SC）的胞膜均可見，表達面積大小不一，界限欠清楚，呈棕黃色彌漫性著色。圖像分析結(jié)果顯示：NGF的平均灰度指數(shù)：B、C、D組在21、28天逐漸增加：C、 D組大于B組，D組大于C組。并且C、D組第28天時與本組14、21天比明顯增多。
　　 結(jié)論：
　　 1.ERSVV有利于損傷神經(jīng)的再生與修復(fù)。
　　 2.ERSVV神經(jīng)周圍給