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文檔簡介
1、目的:周圍神經卡壓是常見的、多發(fā)性損傷。這種神經損傷可造成神經功能障礙,嚴重影響患者的生活質量。精湛的顯微外科技術為卡壓后神經的再生與修復提供良好的基礎。但神經卡壓后,如何對其加以保護,最大限度地減輕其繼發(fā)性損害,盡快恢復其傳導功能,仍是目前尚未解決的難題。近年來國內、外做了大量的相關研究,發(fā)現(xiàn)了一些對卡壓神經再生與修復有促進作用的生物活性物質和相關藥物(如:神經營養(yǎng)因子、牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液等),并逐漸成為卡壓后神經再生與修復
2、領域的又一熱點。
牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液(ERSVV)是一種國產的新型生物制劑,是由牛痘病毒疫苗致敏家兔后的皮膚組織提純精制液,具有神經修復、鎮(zhèn)痛、免疫調節(jié)作用。它有肌肉注射、靜脈注射、腹腔注射、神經周圍給藥、蛛網膜下腔給藥等多種給藥途徑。但ERSVV直接注入受損神經周圍與肌肉注射對卡壓后神經再生與修復有無差別尚未見報道。本實驗采用SD大鼠,參照Bennett and Xie設計的坐骨神經慢性卡壓模型(CCI),探討
3、ERSVV兩種不同的給藥途徑對卡壓后神經的再生與修復的影響。旨在為臨床治療周圍神經損傷提供依據(jù)。
方法:雄性SD大鼠80只,體重280±20克,隨機分為4組,每組20只:A組為假手術組(正常對照組),B組為模型組(卡壓對照組),C組為肌肉注射ERSVV,D組為神經周圍給予ERSVV。麻醉成功后,A組僅顯露右側坐骨神經而不卡壓,即閉合切口;B、C、 D組分別于右側大腿制備CCI模型,并在神經管旁置管。每天經導管注射注射用水0
4、.2ml,防止導管阻塞。術后14天大鼠行為反應最強烈,更易激惹,取材后鏡下觀察到神經水腫、軸突變性、數(shù)目減少、髓鞘崩解(Guilbarld報道該模型建立需要14天),證明CCI模型制備成功。B組14天后繼續(xù)經導管注射注射用水0.2ml直至取材.C組在B組的基礎上肌肉注射ERSVV0.2ml,而D組將注射用水改為ERSVV0.2ml直至取材。四組分別于CCI術后14天、21天、28天測大鼠的坐骨神經功能指數(shù)(SFI)。并且在各組中隨機取6
5、只大鼠,麻醉下顯露坐骨神經,觀察神經的大體變化,測量神經傳導速度(NCV)及振幅(APT)并取材,在光鏡和電鏡下觀察坐骨神經的超微結構、作圖樣分析計算神經軸突數(shù)目和髓鞘厚度,免疫組織化學檢測神經生長因子(NGF)。
結果:
1.大體觀察:CCI大鼠術后一般狀況良好,體重無明顯減輕,體毛富有光澤,覓食飲水正常?;贾顒訙p少、無力,足爪伸展受限,出現(xiàn)舔足、梳理、搔扒等癥狀,且逐漸加重。開始給藥后,各組大鼠患肢活動
6、逐漸恢復,癥狀逐漸減輕。在術后第14天,A組神經表面光滑,與周圍組織組無粘連。B、C、D各組神經明顯充血、水腫;卡壓段神經外膜顏色較紅。按擬定時間隨著藥物的不斷應用,在術后第21、28天B組充血、水腫程度仍較重,C、D兩組充血、水腫明顯減輕,卡壓段神經外膜的顏色逐漸變白。而D組的神經外膜顏色和水腫程度又比C組輕。
2.坐骨神經功能指數(shù)(SFI):與A組比,B、C、D三組第21、28天SFI明顯降低,與B組比,C、D兩組第2
7、1、28天SFI明顯升高,而D組明顯高于C組。C、D兩組28天時分別與21天、14天時進行組內比較升高非常顯著。
3.神經電生理指標分析:A組的NCV;AMP在各測試點無明顯的變化。C、D組21、28天時高于B組而低于A組,D組高于C組。組內比較:B組升高不明顯差異無統(tǒng)計學意義;C、D兩組28天時明顯優(yōu)于21天時,優(yōu)于14天時更為明顯。
4.軸突計數(shù)和髓鞘厚度:與A組比較,各時間點B、C、D組明顯變小。在第2
8、1、28天時,C、D組的均高于B組,D組高于C組,并且C、D組28天時均高于本組第14、21天時的值。但B組升高不明顯無統(tǒng)計學意義。
5.組織病理學觀察,光鏡下:A組神經纖維排列整齊,髓鞘完整。在第14天時B、C、D表現(xiàn)為相似的神經大量斷裂,髓鞘脫落神經水腫嚴重,神經軸突密度減少。B組第28天時,有細小神經生長但是沒有髓鞘,C組可以看到髓鞘變厚、數(shù)量增多,D組在28天時有小的并且有薄的神經髓鞘的軸突發(fā)芽。電鏡下:A第14天
9、時神經的髓鞘、神經膜細胞與基底膜結構完整,髓鞘板層清晰可見。B、C、D組髓鞘明顯水腫,線粒體和微絲微管明顯減少,髓鞘部分增生形狀不規(guī)則神經髓板水腫。B組第28天時軸突部分斷裂,脊膜消失融合,線粒體空化,板層結構破壞,微絲微管減少,損傷較輕。C組大部分脊膜消失融合,可見微絲微管,損傷較輕,髓鞘變厚,板層變規(guī)則,但D組有髓神經纖維的數(shù)量、軸突直徑、髓鞘厚度、軸突內線粒體、微絲、微管、數(shù)量等均大于C組。
6.免疫組織化學:A組的
10、NGF不表達或少量表達。而B、C、D組的NGF表達在變性及再生神經纖維的軸索和雪旺細胞(SC)的胞膜均可見,表達面積大小不一,界限欠清楚,呈棕黃色彌漫性著色。圖像分析結果顯示:NGF的平均灰度指數(shù):B、C、D組在21、28天逐漸增加:C、 D組大于B組,D組大于C組。并且C、D組第28天時與本組14、21天比明顯增多。
結論:
1.ERSVV有利于損傷神經的再生與修復。
2.ERSVV神經周圍給
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