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文檔簡介
1、目的:周圍神經(jīng)損傷尤其是慢性卡壓所致的坐骨神經(jīng)損傷是臨床上的常見病,其功能恢復(fù)的程度直接影響著病人生活的質(zhì)量,因此如何促進(jìn)受損神經(jīng)的再生與修復(fù)一直是臨床研究的重要課題。影響神經(jīng)再生與修復(fù)的因素很多,其中損傷處的微環(huán)境是最主要的影響因素。一直以來常用的消炎鎮(zhèn)痛液對(duì)微環(huán)境起著重要的調(diào)節(jié)作用,目前隨著牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液(Extract from Rabbit Skin lnflamed by Vaccinia V irus for
2、lnjection,ERSVV)越來越多的用于神經(jīng)修復(fù)的治療,其給藥途徑從肌肉注射、靜脈輸注到腹腔神經(jīng)叢、蛛網(wǎng)膜下腔也在不斷拓寬。本實(shí)驗(yàn)采用SD大鼠,參照Bennett and Xie設(shè)計(jì)的坐骨神經(jīng)慢性卡壓模型,探討消炎鎮(zhèn)痛液伍用ERSVV,ERSVV于受損神經(jīng)周圍直接給藥對(duì)神經(jīng)修復(fù)的作用是否優(yōu)于肌肉注射。旨在為臨床治療提供依據(jù)。
方法:雄性SD大鼠80只,體重280+20克,隨機(jī)分為4組,每組20只:A組為假手術(shù)組(正常
3、對(duì)照組),B組為模型組(卡壓對(duì)照組),C組為神經(jīng)周圍給予消炎鎮(zhèn)痛液,肌肉注ERSVV,D組為神經(jīng)周圍給予消炎鎮(zhèn)痛液和ERSW。用10%水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉后,大鼠左側(cè)臥位于操作臺(tái)上,股部去毛,在無菌操作下暴露右下肢坐骨神經(jīng)。A組僅暴露神經(jīng)而不進(jìn)行結(jié)扎處理,即縫合切口;B、C、D三組行CCI造模。選擇坐骨神經(jīng)分成三支前的1cm主干部位,以4/0鉻制羊腸線松扎四道,每道間隔1mm,打結(jié)松緊以肢體輕微抽動(dòng)為宜,并在神經(jīng)管旁置管
4、縫合切口。對(duì)側(cè)下肢肌注慶大霉素(0.2ml,10mg/ml)預(yù)防感染。各組每天經(jīng)導(dǎo)管注射注射用水0.2ml,防止導(dǎo)管阻塞。造模后14天大鼠行為反應(yīng)最強(qiáng)烈更易激惹,取材后鏡下觀察到神經(jīng)水腫、軸突變性、數(shù)目減少、髓鞘崩解(Guilband報(bào)道該模型建立需要14天)證明CCI模型制備成功。B組14天后繼續(xù)經(jīng)導(dǎo)管注射注射用水0.2ml直至取材.C、D兩組在14天通過所置的管注射消炎鎮(zhèn)痛液(5mg/ml復(fù)方倍他米松0.05ml+2%利多卡因0.0
5、5ml+0.5mg/ml維生素B120.05ml+滅菌用水0.05ml).從第15天始,C組每天注射混合液0.2 ml(注射用水0.1ml+2%利多卡因0.05ml+0.5mg/ml維生素B120.05ml),同時(shí)肌肉注射ERSVV0.1ml。D組是將ERSVV0.1ml加在混合液中替代注射用水,直到取材。四組分別于CCI術(shù)后第14天、21天、28天測(cè)坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(Sciatic functional index,SFI);并且在各
6、組中隨機(jī)取7只大鼠,麻醉下暴露坐骨神經(jīng),觀察神經(jīng)的大體變化;測(cè)量神經(jīng)傳導(dǎo)速度(nerve conduction velocity,NCV)及振幅(Amplitude,APT)并取材;在光鏡和電鏡下觀察坐骨神經(jīng)的超微結(jié)構(gòu)、作圖樣分析計(jì)算神經(jīng)軸突數(shù)目和髓鞘厚度;用免疫組化法觀察神經(jīng)生長因子(Nerve growth factor,NGF)的數(shù)目變化。
結(jié)果:
1.SFI A組約為-0.2各時(shí)間點(diǎn)無明顯變化。B組維
7、持在-33左右。C、D組第21天均高于B組而低于A組:第28天C組明顯大于B組(P<0.05);D組大于B組非常顯著(P<0.01);D組明顯大于C組(P<0.05);組內(nèi)比較C、D兩組28天時(shí)明顯優(yōu)于21天時(shí)(P<0.05),優(yōu)于14天時(shí)更為明顯(P<0.05)。
2.NCV與AMP與A組比,B、C、D三組第21天降低非常顯著(P<0.01);第28天明顯降低(P<0.05)。21、28天C、D兩組均高于B組(P<0.0
8、5);D組明顯高于C組(P<0.05);C、D兩組分別與28天、14天時(shí)進(jìn)行組內(nèi)比較升高非常顯著(P<0.05;P<0.01)。
3.軸突計(jì)數(shù)和髓鞘厚度C、D組第21、28天均大于B組低于A組;D組明顯大于C組(P<0.05); C、D兩組分別與28天、14天時(shí)進(jìn)行組內(nèi)比較升高非常顯著(P<0.05;P<0.01)。
4.免疫組織化學(xué) A組的NGF不表達(dá)或少量表達(dá)。B、C、D、E組在變性及再生神經(jīng)纖維的軸索和
9、雪旺細(xì)胞(SC)的胞膜均有一定數(shù)量的表達(dá)。圖像分析結(jié)果顯示:損傷處神經(jīng)的平均灰度指數(shù):組內(nèi)比,B、C、D三組28天均大于21天和14天;但B組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;21、28天時(shí)C、 D兩組均大于B組(P<0.05;P<0.01),D組大于C組(P<0.05)。
5.大體及組織病理學(xué)觀察大體觀察 A組神經(jīng)光滑,與周圍組織無粘連。造模后14天,B、C、D各組坐骨神經(jīng)明顯充血、水腫、增粗,外膜顏色較紅。21、28天B組減輕不明顯,C、
10、D組充血、水腫明顯減輕,外膜的顏色較14天時(shí)變白。D組充血、水腫明顯輕于C組。光鏡下觀察A組神經(jīng)纖維排列整齊,髓鞘完好。第14天時(shí)B、C、D組神經(jīng)纖維排列紊亂,髓鞘脫落神經(jīng)水腫嚴(yán)重,神經(jīng)軸突密度減少,可見大量的脫落髓鞘。在28天時(shí)B組神經(jīng)纖維的排列和軸突數(shù)目有所增多,但與C、D兩組同時(shí)間比較有明顯差異。C、D組的神經(jīng)纖維排列較整齊,方向性較好,雪旺細(xì)胞增殖明顯,神經(jīng)纖維生長較好,而D組明顯優(yōu)于C組,鏡下可見髓鞘變厚、軸突數(shù)量增多。上述神
11、經(jīng)修復(fù)情況28天C、D兩組明顯好于21天。電鏡下觀察在第14天時(shí),A組神經(jīng)完整,結(jié)構(gòu)規(guī)則;第28天時(shí)B組軸突部分?jǐn)嗔眩鼓は诤?,微絲微管減少。C組大部分脊膜消失融合,可見微絲微管,損傷較輕,髓鞘變厚,板層變規(guī)則,但D組有髓神經(jīng)纖維的數(shù)量、軸突直徑、髓鞘厚度、軸突內(nèi)線粒體、微絲、微管、數(shù)量等均大于D組。C、D兩組修復(fù)情況均明顯好于21天時(shí)。
結(jié)論:1.消炎鎮(zhèn)痛液伍用ERSVV有利于損傷神經(jīng)的修復(fù)。2.ERSVV神經(jīng)周圍給
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