消炎鎮(zhèn)痛液不同途徑伍用牛痘疫苗致炎兔皮提取物對大鼠坐骨神經(jīng)損傷修復的作用.pdf

1、目的：周圍神經(jīng)損傷尤其是慢性卡壓所致的坐骨神經(jīng)損傷是臨床上的常見病，其功能恢復的程度直接影響著病人生活的質(zhì)量，因此如何促進受損神經(jīng)的再生與修復一直是臨床研究的重要課題。影響神經(jīng)再生與修復的因素很多，其中損傷處的微環(huán)境是最主要的影響因素。一直以來常用的消炎鎮(zhèn)痛液對微環(huán)境起著重要的調(diào)節(jié)作用，目前隨著牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液（Extract from Rabbit Skin lnflamed by Vaccinia V irus for

2、lnjection，ERSVV）越來越多的用于神經(jīng)修復的治療，其給藥途徑從肌肉注射、靜脈輸注到腹腔神經(jīng)叢、蛛網(wǎng)膜下腔也在不斷拓寬。本實驗采用SD大鼠，參照Bennett and Xie設計的坐骨神經(jīng)慢性卡壓模型，探討消炎鎮(zhèn)痛液伍用ERSVV，ERSVV于受損神經(jīng)周圍直接給藥對神經(jīng)修復的作用是否優(yōu)于肌肉注射。旨在為臨床治療提供依據(jù)。
　　 方法：雄性SD大鼠80只，體重280+20克，隨機分為4組，每組20只：A組為假手術組（正常

3、對照組），B組為模型組（卡壓對照組），C組為神經(jīng)周圍給予消炎鎮(zhèn)痛液，肌肉注ERSVV，D組為神經(jīng)周圍給予消炎鎮(zhèn)痛液和ERSW。用10％水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉后，大鼠左側臥位于操作臺上，股部去毛，在無菌操作下暴露右下肢坐骨神經(jīng)。A組僅暴露神經(jīng)而不進行結扎處理，即縫合切口；B、C、D三組行CCI造模。選擇坐骨神經(jīng)分成三支前的1cm主干部位，以4/0鉻制羊腸線松扎四道，每道間隔1mm，打結松緊以肢體輕微抽動為宜，并在神經(jīng)管旁置管

4、縫合切口。對側下肢肌注慶大霉素（0.2ml，10mg/ml）預防感染。各組每天經(jīng)導管注射注射用水0.2ml，防止導管阻塞。造模后14天大鼠行為反應最強烈更易激惹，取材后鏡下觀察到神經(jīng)水腫、軸突變性、數(shù)目減少、髓鞘崩解（Guilband報道該模型建立需要14天）證明CCI模型制備成功。B組14天后繼續(xù)經(jīng)導管注射注射用水0.2ml直至取材.C、D兩組在14天通過所置的管注射消炎鎮(zhèn)痛液（5mg/ml復方倍他米松0.05ml+2％利多卡因0.0

5、5ml+0.5mg/ml維生素B120.05ml+滅菌用水0.05ml）.從第15天始，C組每天注射混合液0.2 ml（注射用水0.1ml+2％利多卡因0.05ml+0.5mg/ml維生素B120.05ml），同時肌肉注射ERSVV0.1ml。D組是將ERSVV0.1ml加在混合液中替代注射用水，直到取材。四組分別于CCI術后第14天、21天、28天測坐骨神經(jīng)功能指數(shù)（Sciatic functional index，SFI）；并且在各

6、組中隨機取7只大鼠，麻醉下暴露坐骨神經(jīng)，觀察神經(jīng)的大體變化；測量神經(jīng)傳導速度（nerve conduction velocity，NCV）及振幅（Amplitude，APT）并取材；在光鏡和電鏡下觀察坐骨神經(jīng)的超微結構、作圖樣分析計算神經(jīng)軸突數(shù)目和髓鞘厚度；用免疫組化法觀察神經(jīng)生長因子（Nerve growth factor，NGF）的數(shù)目變化。
　　 結果：
　　 1.SFI A組約為-0.2各時間點無明顯變化。B組維

7、持在-33左右。C、D組第21天均高于B組而低于A組：第28天C組明顯大于B組（P<0.05）；D組大于B組非常顯著（P<0.01）；D組明顯大于C組（P<0.05）；組內(nèi)比較C、D兩組28天時明顯優(yōu)于21天時（P<0.05），優(yōu)于14天時更為明顯（P<0.05）。
　　 2.NCV與AMP與A組比，B、C、D三組第21天降低非常顯著（P<0.01）；第28天明顯降低（P<0.05）。21、28天C、D兩組均高于B組（P<0.0

8、5）；D組明顯高于C組（P<0.05）；C、D兩組分別與28天、14天時進行組內(nèi)比較升高非常顯著（P<0.05；P<0.01）。
　　 3.軸突計數(shù)和髓鞘厚度C、D組第21、28天均大于B組低于A組；D組明顯大于C組（P<0.05）； C、D兩組分別與28天、14天時進行組內(nèi)比較升高非常顯著（P<0.05；P<0.01）。
　　 4.免疫組織化學 A組的NGF不表達或少量表達。B、C、D、E組在變性及再生神經(jīng)纖維的軸索和

9、雪旺細胞（SC）的胞膜均有一定數(shù)量的表達。圖像分析結果顯示：損傷處神經(jīng)的平均灰度指數(shù)：組內(nèi)比，B、C、D三組28天均大于21天和14天；但B組無統(tǒng)計學意義；21、28天時C、 D兩組均大于B組（P<0.05；P<0.01），D組大于C組（P<0.05）。
　　 5.大體及組織病理學觀察大體觀察 A組神經(jīng)光滑，與周圍組織無粘連。造模后14天，B、C、D各組坐骨神經(jīng)明顯充血、水腫、增粗，外膜顏色較紅。21、28天B組減輕不明顯，C、

10、D組充血、水腫明顯減輕，外膜的顏色較14天時變白。D組充血、水腫明顯輕于C組。光鏡下觀察A組神經(jīng)纖維排列整齊，髓鞘完好。第14天時B、C、D組神經(jīng)纖維排列紊亂，髓鞘脫落神經(jīng)水腫嚴重，神經(jīng)軸突密度減少，可見大量的脫落髓鞘。在28天時B組神經(jīng)纖維的排列和軸突數(shù)目有所增多，但與C、D兩組同時間比較有明顯差異。C、D組的神經(jīng)纖維排列較整齊，方向性較好，雪旺細胞增殖明顯，神經(jīng)纖維生長較好，而D組明顯優(yōu)于C組，鏡下可見髓鞘變厚、軸突數(shù)量增多。上述神

11、經(jīng)修復情況28天C、D兩組明顯好于21天。電鏡下觀察在第14天時，A組神經(jīng)完整，結構規(guī)則；第28天時B組軸突部分斷裂，脊膜消失融合，微絲微管減少。C組大部分脊膜消失融合，可見微絲微管，損傷較輕，髓鞘變厚，板層變規(guī)則，但D組有髓神經(jīng)纖維的數(shù)量、軸突直徑、髓鞘厚度、軸突內(nèi)線粒體、微絲、微管、數(shù)量等均大于D組。C、D兩組修復情況均明顯好于21天時。
　　 結論：1.消炎鎮(zhèn)痛液伍用ERSVV有利于損傷神經(jīng)的修復。2.ERSVV神經(jīng)周圍給