黃芪多糖和牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液預(yù)先給藥對(duì)孕鼠鞘內(nèi)注入布比卡因脊神經(jīng)毒性的影響.pdf

1、近年來,國內(nèi)外產(chǎn)科病人應(yīng)用椎管內(nèi)麻醉進(jìn)行剖宮產(chǎn)手術(shù)麻醉、分娩鎮(zhèn)痛和術(shù)后止痛的比率逐年增加,但是臨床工作中發(fā)現(xiàn),部分產(chǎn)婦應(yīng)用椎管內(nèi)麻醉后發(fā)生神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥。麻醉藥阻滯效能敏感性和神經(jīng)毒性的研究存在很大爭(zhēng)議。綜合文獻(xiàn)報(bào)道,神經(jīng)電生理學(xué)方面研究認(rèn)為妊娠與分娩增加局部麻醉藥的中樞、中軸、周圍神經(jīng)的阻滯效能敏感性和神經(jīng)毒性作用, 因而減少對(duì)此類藥物的需要量。
　　 產(chǎn)婦不同于一般病人,對(duì)多數(shù)產(chǎn)婦而言,妊娠分娩是正常的生理過程,減少和避免產(chǎn)

2、后并發(fā)癥、尤其是神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥的發(fā)生,對(duì)提高產(chǎn)婦產(chǎn)后生活質(zhì)量,顯得尤為重要。目前關(guān)于局部麻醉藥神經(jīng)毒性損傷防治的研究尚未取得確切效果。黃芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)是中藥黃芪的主要有效成分之一,其不但具有清除自由基、抵抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng),有效減輕神經(jīng)細(xì)胞的凋亡的作用,而且還可以通過激活細(xì)胞免疫,升高IL-1β水平而促進(jìn)脊神經(jīng)損傷后的修復(fù),對(duì)脊神經(jīng)再生有一定作用。黃芪多糖能否減輕布比卡因的脊神經(jīng)毒性

3、損傷反應(yīng)目前暫未見研究報(bào)道。
　　 本研究通過制備孕鼠鞘內(nèi)注入布比卡因的模型,探討妊娠分娩期間局部麻醉藥阻滯效能敏感性和神經(jīng)毒性是否改變,鞘內(nèi)注入布比卡因?qū)е律窠?jīng)細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,以及黃芪多糖和牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液預(yù)先給藥對(duì)布比卡因脊神經(jīng)毒性的保護(hù)作用,為藥物防治妊娠分娩期間局部麻醉藥神經(jīng)毒性損傷提供一定實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 第一部分：鞘內(nèi)注入布比卡因?qū)υ惺笊窠?jīng)功能及背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞caspase-8和caspa

4、se-9基因的影響
　　 目的：比較孕鼠和非孕鼠鞘內(nèi)注入布比卡因?qū)ι窠?jīng)功能及背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞caspase-9和caspase-8基因表達(dá)的影響,探討妊娠分娩期間脊神經(jīng)對(duì)布比卡因的阻滯效能敏感性是否改變及其機(jī)制。
　　 方法：健康妊娠17日及非孕雌性SD大鼠,取鞘內(nèi)置管成功的兩種鼠各18只,孕鼠體重350～400g,非孕鼠體重200～220g,完全隨機(jī)方法分成6組(n=6)。孕鼠對(duì)照組(PN組)與2％布比卡因孕鼠組(P2B

5、組)及4％布比卡因孕鼠組(P4B組)；非孕鼠對(duì)照組(N組)與2％布比卡因非孕鼠組(2B組)及4％布比卡因非孕鼠組(4B組)。PN與N組:鞘內(nèi)注射生理鹽水30μl,其余4組相應(yīng)鞘內(nèi)分別注入2％或4％布比卡因30μl。鞘內(nèi)注藥后10min、20min、30min、1h、2h、4h、1d、2d、3d和4d測(cè)定甩尾反應(yīng)潛伏期TFL,用最大效應(yīng)百分比MPE表示,并進(jìn)行下肢運(yùn)動(dòng)功能MF評(píng)分。4d后各組大鼠行斷頸處死,分離背根神經(jīng)節(jié),Western

6、blot分析caspase-8和caspase-9蛋白表達(dá)水平以及RT-PCR檢測(cè)caspase-8和caspase-9mRNA的表達(dá)。
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,置管前后TFL組間比較采用單因素方差分析,置管前后的比較采用配對(duì),檢驗(yàn)。MPE值比較采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析。caspase-8,9蛋白和mRNA表達(dá)比較采用單因素方差分析,多重比較采用Bonferron

7、i法(方差齊)或DunnettT3法(方差不齊)。運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分以中位數(shù)(第10,90位點(diǎn)百分位數(shù))表示,多組比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：妊娠期間孕鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞對(duì)布比卡因的阻滯效能敏感性增大。鞘內(nèi)注入相同濃度和劑量布比卡因,孕鼠感覺、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)阻滯持續(xù)時(shí)間明顯長(zhǎng)于非孕鼠。布比卡因是通過線粒體通路活化caspase-9基因誘導(dǎo)大鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞發(fā)生凋亡。
　　 第

8、二部分：多次鞘內(nèi)注入布比卡因?qū)υ惺笊窠?jīng)功能及背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的影響
　　 目的：比較孕鼠和非孕鼠多次鞘內(nèi)注入布比卡因?qū)ι窠?jīng)功能及背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的影響,探討妊娠分娩期間布比卡因脊神經(jīng)毒性是否改變及其機(jī)制。
　　 方法：健康妊娠17日及非孕雌性SD大鼠,取鞘內(nèi)置管成功的兩種鼠各12只,孕鼠體重350～400g,非孕鼠體重200～220g,完全隨機(jī)方法分成4組(n=6)。孕鼠2％布比卡因組(P2B組)和非孕鼠2％布比卡因

9、組(2B組)鞘內(nèi)分別注入2％布比卡因30μl,20μl和10μl,共3次,每次間隔1h；孕鼠對(duì)照組(PN組)和非孕鼠對(duì)照組(N組)鞘內(nèi)分別注入相同體積的生理鹽水。在第3次鞘內(nèi)注藥后1d、2d、3d、4d和5d測(cè)定TFL,用最大效應(yīng)百分比MPE表示,并進(jìn)行下肢運(yùn)動(dòng)功能MF評(píng)分。5d后多聚甲醛灌注,分離背根神經(jīng)節(jié),進(jìn)行病理組織學(xué)觀察,TUNEL法檢測(cè)背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡情況以及免疫組織化學(xué)法檢測(cè)caspase-9蛋白表達(dá)。
　　 采用

10、SPSSl3.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,置管前后TFL組間比較采用單因素方差分析,置管前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。MPE值比較采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析。凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)和caspase-8,9陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)比較采用單因素方差分析,多重比較采用Bonferroni法(方差齊)或Dunnett T3法(方差不齊)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：妊娠分娩期間布比卡因?qū)Υ笫蟊掣窠?jīng)節(jié)細(xì)胞的毒

11、性增大,多次鞘內(nèi)注入相同濃度和劑量布比卡因后,孕鼠出現(xiàn)明顯的感覺功能障礙和神經(jīng)細(xì)胞損害,而運(yùn)動(dòng)功能未受影響,其背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡與caspase-9基因大量活化密切相關(guān)。
　　 第三部分：黃芪多糖預(yù)先給藥對(duì)孕鼠鞘內(nèi)注入布比卡因脊神經(jīng)毒性的影響
　　 目的：探討黃芪多糖預(yù)先給藥是否可以減輕孕鼠鞘內(nèi)注入布比卡因的脊神經(jīng)毒性及其機(jī)制。
　　 方法：取鞘內(nèi)置管成功健康妊娠17日孕鼠30只,完全隨機(jī)方法分成5組(n=6)。

12、對(duì)照組(N組),2％布比卡因單次給藥組(2B組),2％布比卡因單次給藥黃芪多糖預(yù)處理組(2H組),2％布比卡因多次給藥組(R2B組),2％布比卡因多次給藥黃芪多糖預(yù)處理組(R2H組)。N組:鞘內(nèi)注射生理鹽水30μl,腹腔注入生理鹽水2ml。2B組:鞘內(nèi)注入2％布比卡因30μl,腹腔注入生理鹽水2ml。R2B組:鞘內(nèi)分別注入2％布比卡因30μl,20μl和10μl,共3次,每次間1h,腹腔注入生理鹽水2ml。2H組:鞘內(nèi)注入2％布比卡因3

13、0μl,腹腔注入黃芪多糖2ml。R2H組:鞘內(nèi)分別注入2％布比卡因30μl,20μl和10μl,共3次,每次間隔1h,腹腔注入黃芪多糖2ml。黃芪多糖給藥方法為:25mg/kg,生理鹽水稀釋成2ml,于鞘內(nèi)給藥前連續(xù)注藥3天,鞘內(nèi)給藥后連續(xù)注藥4天。在第3次鞘內(nèi)注藥后1d、2d、3d、4d和5d測(cè)定TFL,用最大效應(yīng)百分比MPE表示,并進(jìn)行下肢運(yùn)動(dòng)功能MF評(píng)分。5d后多聚甲醛灌注,分離背根神經(jīng)節(jié),進(jìn)行病理組織學(xué)觀察,TUNEL法檢測(cè)背根

14、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡情況以及免疫組織化學(xué)法檢測(cè)caspase-9蛋白表達(dá)。
　　 采用SPSSl3.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,置管前后TFL組間比較采用單因素方差分析,置管前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。MPE值比較采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析。凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)和caspase-9陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)比較采用單因素方差分析,多重比較采用Bonferroni法(方差齊)或DunnettT3法(方差不齊)。P<0.05為差異有

15、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：預(yù)先給予黃芪多糖可以減輕孕鼠鞘內(nèi)注入布比卡因的脊神經(jīng)毒性,其機(jī)制可能與抑制caspase-9蛋白表達(dá),抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡有關(guān)。
　　 第四部分：牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液預(yù)先給藥對(duì)孕鼠鞘內(nèi)注入布比卡因脊神經(jīng)毒性的影響
　　 目的：探討牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液預(yù)先給藥是否可以減輕孕鼠鞘內(nèi)注入布比卡因的脊神經(jīng)毒性及其機(jī)制。
　　 方法：取鞘內(nèi)置管成功孕鼠18只,完全隨機(jī)方法分成3組

16、(n=6)。對(duì)照組(N組),2％布比卡因多次給藥組(R2B組),2％布比卡因多次給藥AGC預(yù)處理組(R2A組)。N組:鞘內(nèi)注射生理鹽水30μl,20μl和10μl,共3次,每次間隔1h,腹腔注入生理鹽水。R2B組:鞘內(nèi)分別注入2％布比卡因30μl,20μl和10μl,共3次,每次間隔1h,腹腔注入生理鹽水。R2A組:鞘內(nèi)分別注入2％布比卡因30μl,20μl和10μl,共3次,每次間隔1h,腹腔注入AGC。各組鞘內(nèi)注藥完畢后,用10μl

17、生理鹽水沖洗導(dǎo)管。AGC給藥方法為:AGC稀釋液(10u/ml),按100u/kg,于鞘內(nèi)給藥前連續(xù)灃藥3天,鞘內(nèi)給藥后連續(xù)注藥4天。其余組腹腔注入等體積生理鹽水(10ml/kg)。在第3次鞘內(nèi)注藥后1d、2d、3d、4d和5d測(cè)定TFL,用最大效應(yīng)百分比MPE表示,并進(jìn)行下肢運(yùn)動(dòng)功能MF評(píng)分。5d后多聚甲醛灌注,分離背根神經(jīng)節(jié),進(jìn)行病理組織學(xué)觀察,TUNEL法檢測(cè)背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡情況以及免疫組織化學(xué)法檢測(cè)caspase-9蛋白表達(dá)。

18、
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,置管前后TFL組間比較采用單因素方差分析,置管前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。MPE值比較采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析。凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)和caspase-9陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)比較采用單因素方差分析,多重比較采用Bonferroni法(方差齊)或DunnettT3法(方差不齊)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：預(yù)先給予牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射