口服減毒鼠傷寒沙門菌介導ePNP-MePdR自殺基因系統(tǒng)對荷瘤鼠協(xié)同抗腫瘤作用的研究.pdf

1、隨著細菌學和分子生物學的發(fā)展,拓寬了細菌介導腫瘤治療的思路,減毒沙門氏菌載體系統(tǒng)作為治療惡性腫瘤的呈遞工具逐步得到人們的認可。沙門氏菌是兼性厭氧菌,在好氧和厭氧環(huán)境都能生長,所以可在腫瘤的厭氧環(huán)境繁殖。為了使沙門氏菌成為安全的基因傳遞系統(tǒng),通過突變代謝過程的基因來限制其致病性,降低毒性,使它可在生長旺盛的腫瘤中積聚。體內外實驗發(fā)現(xiàn),減毒沙門氏菌培養(yǎng)方便且可將含外源基因的質粒轉至哺乳動物細胞內,促進了減毒沙門氏菌載體系統(tǒng)的應用。
　

2、　 ePNP/MePdR自殺基因系統(tǒng)作為一種基因導向性酶前藥治療法(gene-directed enzyme prodrug therapy,GDEPT)正受到越來越多的關注。6-甲基嘌呤-2'-脫氧核苷(6-methylpurine-2'-deoxyriboside,MePdR)本身是無毒的藥物前體,可被大腸桿菌(Escherichia coli)的嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,e

3、PNP)分解成有毒的6-甲基嘌呤(6-methylpurine,MeP)。MeP會抑制DNA、RNA和蛋白質合成,高效殺傷腫瘤細胞;哺乳動物來源的PNP則不能分解MePdR。由于ePNP/MePdR自殺基因系統(tǒng)有強大的旁觀者效應,可以殺傷非增殖期的腫瘤細胞,它被認為是治療神經膠質瘤、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、結腸癌、黑色素瘤等人類惡性實體瘤的最佳選擇之一。
　　 利用減毒鼠傷寒沙門氏菌介導ePNP/MePdR自殺系統(tǒng),國際

4、上還沒有人嘗試過。本研究采用減毒鼠傷寒沙門氏菌SC36(hisGaro A purI cys),它是由本實驗室對SL3261進行二次DES誘變篩選而得的,屬嘌呤和氨基酸雙重缺陷株,毒性較SL3261更低。重組菌株攜帶的外源基因包括大腸桿菌嘌呤核苷磷酸化酶基因(ePNP)、鼠源的白介素-12(mIL-12)和胞嘧啶脫氨酶(CD),口服治療常見的鼠源實體瘤(Lewis肺癌和B16F10黑色素瘤)。我們首先構建了CMV通用啟動子調控下的ePN

5、P基因表達載體pEGFP-C1-PNP。為了研究減毒沙門氏菌介導的pEGFP-C1-PNP在體內外表達情況,將pEGFP-C1-PNP,白介素-12(mIL-12)、胞嘧啶脫氨酶(CD)分別轉化至減毒沙門氏菌SC36中。我們利用MTT,凋亡試驗等試驗,評估沙門氏菌介導的ePNP/MePdR單自殺基因系統(tǒng)、ePNP/MePdR和CD/5-FC雙自殺基因系統(tǒng),細胞因子mIL-12和ePNP/MePdR聯(lián)合系統(tǒng)在體外殺傷腫瘤細胞的效應。體內實