卵黃抗體對鼠傷寒沙門氏菌感染小鼠腸道免疫應答的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、當動物機體受到外來病原菌入侵時，免疫系統(tǒng)被激活以抵御病原菌對機體的傷害。然而免疫系統(tǒng)的高度活化會導致動物采食量及體重下降等免疫應激現(xiàn)象，這給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。因此如何緩解免疫應激具有非常重要的實際意義?？股乜捎行Ц纳苿游锏纳L狀況，但隨著動物產(chǎn)品中藥物殘留和細菌耐藥性等問題的出現(xiàn)，迫切需要尋找一種既能有效控制養(yǎng)殖動物疾病，又不帶來食品安全問題和環(huán)境隱患的新產(chǎn)品以替代抗生素。研究表明，卵黃抗體可用于動物感染性疾病的防治，因其具有安

2、全、高效、特異性強等優(yōu)點，所以被認為是最有前景的新一代綠色、安全型抗生素替代品。然而，關于IgY的作用機理現(xiàn)在還未闡明，IgY在抑制病原菌的同時，能否對動物機體的免疫系統(tǒng)起到調(diào)節(jié)作用，有待于進一步的研究。本課題在前期研究的基礎上，通過體內(nèi)實驗分析IgY對鼠傷寒沙門氏菌攻毒小鼠腸道黏膜各種T淋巴細胞的影響。此外，通過體外實驗還考察了IgY對巨噬細胞吞噬活性和樹突細胞成熟度的影響。
　　IgY對攻毒小鼠腸道黏膜各種T淋巴細胞的影響:昆

3、明小鼠隨機分為4組，用鏈霉素預處理2d，12h后灌胃PBS、非特異性IgY和特異性IgY，持續(xù)3d，在此期間觀察小鼠的狀態(tài)、死亡率和體重。3d后解剖小鼠并取小腸，分離腸道派爾淋巴結(jié)、上皮層以及固有層的淋巴細胞，用流式細胞儀檢測各種淋巴細胞的數(shù)量變化。結(jié)果表明，鼠傷寒沙門氏菌攻毒后，小鼠精神狀態(tài)萎靡，死亡率達到60％，體重明顯減輕，派爾淋巴結(jié)出現(xiàn)腫大，CD3+T細胞和CD8+T細胞分別提高10％和14％。上皮內(nèi)淋巴細胞出現(xiàn)大量增加，CD8

4、+T細胞和TCRγδ+T細胞分別增加18％和16％。固有層中CD4+T細胞和CD8+T細胞升高8％和12％?？诜禺愋訧gY后，小鼠精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，死亡率降至20％，但體重無明顯變化。派爾淋巴結(jié)腫大狀況好轉(zhuǎn)，并且派爾淋巴結(jié)中總的T細胞（CD3+T細胞）降低6.5％，基本恢復到正常水平。特異性IgY還可顯著降低上皮層中CD8+T細胞和TCRδ+T細胞的比例，分別降低12％和10％。固有層中的淋巴細胞在特異性IgY的作用下，也顯著降低，其中C

5、D4+T細胞和CD8+T細胞分別減少7％和12％。這表明，特異性IgY可緩解鼠傷寒沙門氏菌攻毒引起的炎癥反應，對機體起到保護作用。
　　IgY對巨噬細胞吞噬活性的影響:用FITC標記鼠傷寒沙門氏菌，然后巨噬細胞與細菌共培養(yǎng)3h后，檢測巨噬細胞的吞噬率及NO的釋放量。結(jié)果表明，非特異性IgY和特異性IgY可顯著提高巨噬細胞對細菌的吞噬率，分別提高20％和33％。并且特異性IgY顯著減少了巨噬細胞NO的分泌，使NO的分泌量由原先的26

6、μmol/L降低至14μmol/L。這表明IgY可增強巨噬細胞對細菌的吞噬率并減少炎癥因子的分泌。
　　IgY對樹突細胞成熟度的影響:從小鼠骨髓中分離原代細胞，用10 ng/mL rGM-CSF和rIL-4誘導分化成樹突細胞，收集第7d的未成熟樹突細胞。將鼠傷寒沙門氏菌與未成熟樹突細胞以及特異性IgY共同培養(yǎng)3h，用流式細胞儀檢測樹突細胞表面標志的變化。結(jié)果表明，鼠傷寒沙門氏菌攻毒后樹突細胞表面標志MHCⅡ，CD40，CD80，C