減毒鼠傷寒沙門氏菌為載體的人呼吸道合胞病毒DNA疫苗免疫保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus，RSV)廣泛分布于世界各地，是導(dǎo)致嬰幼兒嚴(yán)重下呼吸道感染的最重要的病毒病原。目前尚無(wú)特異性防治方法，世界衛(wèi)生組織將發(fā)展RSV疫苗列為最優(yōu)先發(fā)展的疫苗項(xiàng)目之一。RSV的11種蛋白中，融合蛋白(Fusion Protein，F(xiàn))是中和抗原，免疫動(dòng)物后，可以產(chǎn)生具有免疫保護(hù)作用的中和抗體，為新型疫苗候選抗原。本實(shí)驗(yàn)中我們用減毒鼠傷寒沙門菌(Salmon

2、ella typhimurium aroA strain SL7207，SL7207)為載體攜帶能夠表達(dá)F蛋白的DNA疫苗，經(jīng)黏膜途徑，開展體內(nèi)免疫效果和免疫保護(hù)作用研究，以期更好了解該候選疫苗免疫生物學(xué)特征。 方法：本研究中我們將能夠表達(dá)RsV F蛋白的真核表達(dá)載體pcDNA3.1/F轉(zhuǎn)化到SL7207，構(gòu)建重組的減毒鼠傷寒沙門菌疫苗SL7207/pcDNA3.1/F，同時(shí)用pcDNA3.1空載體做對(duì)照。分別于O、2、6周三次

3、口服免疫小鼠，通過(guò)體液免疫(IgG)、黏膜免疫(sIgA)、細(xì)胞免疫(CTL、T淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn))等指標(biāo)分析免疫后小鼠RSV特異性免疫應(yīng)答產(chǎn)生情況。最后，利用RSV病毒經(jīng)鼻腔攻擊小鼠，并分別于攻毒后3、5和7天處死小鼠進(jìn)行肺組織病毒含量及肺組織病理學(xué)動(dòng)態(tài)分析了解免疫保護(hù)作用的效果。 結(jié)果：取已轉(zhuǎn)化pcDNA3.1/F的SL7207并提取質(zhì)粒，經(jīng)限制性內(nèi)切酶分析與預(yù)期一致。經(jīng)口服免疫BALB/c小鼠，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組小鼠血清及

4、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage，BAL)中分別產(chǎn)生了有效的血清IgG及sIgA(p<0.01)，血清中抗體亞類分析顯示IgGl和IgG2a的比值為0.96。實(shí)驗(yàn)組CTT反應(yīng)(P<0.01，效靶比值為100：1和50:1)和T淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(p<0.05)均明顯增強(qiáng)。攻毒實(shí)驗(yàn)中，病毒攻擊后3天和5天的小鼠肺部病毒載量，實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組明顯降低(p<0.05)，組織病理學(xué)分析結(jié)果也顯示在炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和肺泡壁厚度方面

5、兩組有顯著性差異(p<0.01)。 結(jié)論：獲得的重組減毒鼠傷寒沙門菌疫苗SL7207/pcDNA3.1/F，能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生有效的體液免疫和細(xì)胞免疫及局部免疫，抗體亞類分析顯示誘導(dǎo)產(chǎn)生了Th1和Th2平衡的免疫應(yīng)答，沒(méi)有產(chǎn)生疾病增強(qiáng)作用，對(duì)RSv感染具有一定的免疫保護(hù)作用。因此我們認(rèn)為以減毒傷寒沙門菌為載體的口服DNA疫苗兼具黏膜免疫及DNA疫苗的雙重優(yōu)點(diǎn)，是RSV等通過(guò)黏膜途徑感染的病毒疫苗研究的重要方向，為今后RSV疫苗免疫