β-淀粉樣多肽人源性單鏈抗體的表達(dá)、純化及其抗體親和力測定.pdf

1、一般認(rèn)為β-淀粉樣多肽(β-amyloid peptide，Aβ)的沉積是阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)的始發(fā)因素，所形成的老年斑和神經(jīng)纖維纏結(jié)是該病的主要病理改變。減少AD患者腦內(nèi)Aβ的積聚并促進(jìn)其清除已成為抗AD病因療法的重要組成部分。針對Aβ的免疫治療包括主動免疫和被動免疫，許多動物實(shí)驗(yàn)證明Aβ的免疫治療可以預(yù)防或清除腦中淀粉樣多肽的沉積，并使動物的認(rèn)知功能得到改善。然而，在Aβ疫苗的臨床試驗(yàn)中雖然部

2、分患者腦內(nèi)特定區(qū)域淀粉樣多肽的沉積得到有效遏制，但由于嚴(yán)重的副作用而被迫提前終止；靶向Aβ的被動免疫療法雖已在AD模型動物上取得顯著效果，但由于單克隆抗體的鼠源性特征限制了其在臨床的進(jìn)一步應(yīng)用。因此，建立以針對Aβ的人源性抗體為基礎(chǔ)的AD免疫療法顯得尤為迫切。 本實(shí)驗(yàn)室的前期研究已經(jīng)以Aβ1-40為靶標(biāo)，從全人源性噬菌體單鏈抗體庫中篩選出了抗Aβ1-40特異性單鏈抗體E3(Single chain variable fragme

3、nt E3，E3 scfv)的基因片段，并為E3 scfv建立了穩(wěn)定的表達(dá)、純化流程。初步的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：E3單鏈抗體可與人工合成的Aβ以及大腦皮層神經(jīng)元天然分泌的Aβ特異性結(jié)合，在體外能阻止或逆轉(zhuǎn)Aβ的聚集，并抑制Aβ聚集物的細(xì)胞毒性作用；E3 scfv的抗原表位初步判斷位于Aβ1-40的24-26位。 本研究在大量優(yōu)化表達(dá)E3 scfv的基礎(chǔ)上，采用表面等離子共振(Surface Plasmon Resonance，SP

4、R)生物傳感器，將Aβ1-40固定于傳感芯片表面，分別以E3 scfv、陽性對照抗體DE2B4、陰性對照抗體9E10為流動相，實(shí)時監(jiān)測Aβ1-40與三種抗體的結(jié)合和解離過程，并對抗原抗體相互作用的模式和動力學(xué)常數(shù)做出分析。結(jié)果顯示：E3 scfv、陽性對照抗體DE2B4均能與Aβ1-40起特異性免疫結(jié)合反應(yīng)，陰性對照抗體9E10與Aβ1-40無特異性結(jié)合；Aβ1-40與E3 scfv及DE284的結(jié)合過程為快結(jié)合慢解離的動力學(xué)過程；DE