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文檔簡介
1、鼠源性單抗在人體使用后可產(chǎn)生人抗鼠抗體(HumanAnti-MouseAntibody,HAMA)反應,而且分子量大,不能有效進入病灶部位,臨床使用受到限制。單鏈抗體(singlechainantibody,ScFV)是由一條連接肽將IgG分子的重鏈和輕鏈的可變區(qū)連接而成的,減少了免疫原性,分子小,實體組織穿透力強,血漿半衰期短,因而在臨床疾病的診斷和治療中具有重要的應用價值。 應用TP-PCR方法構(gòu)建抗人CD28單鏈抗體基因
2、(抗CD28-ScFv)和pET32a-CD28ScFv重組表達載體。SDS-PAGE和Westem-blot分析結(jié)果表明,抗CD28-ScFv在BL21(DE3)中獲得高效表達,表達量占菌體總蛋白30%以上,表達產(chǎn)物以不溶性包涵體的形式存在。經(jīng)過溶解包涵體,體外復性過程和鎳柱親和層析,純化抗CD28-ScFv。應用流式細胞儀和MTT方法分別鑒定純化的抗CD28-ScFv的免疫學活性及生物學功能。 本研究改進了傳統(tǒng)的蛋白復性條
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