丹參酮ⅡA磺酸鈉對穩(wěn)定表達(dá)的人心肌細(xì)胞I-,Ks-電流的作用.pdf

1、實(shí)驗(yàn)背景 緩慢激活延遲整流鉀電流( Iks)是參與人心肌細(xì)胞動作電位復(fù)極，特別是平臺期形成與維持的重要外向離子流。Iks 通道由KCNQ1 基因編碼的α亞單位及KCNE1 基因編碼的β亞單位組成。hKCNQ1/hKCNE1 基因突變或慢性心肌肥厚、慢性心力衰竭等病理過程均可導(dǎo)致Iks 功能異常，引起遺傳性或獲得性長QT 綜合征，LQTS 易引起尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動過速等心律失常，從而危及病人生命。深入研究Iks 通道的藥理特性將可

2、能為此類心律失常的防治提供新線索。 丹參酮ⅡA 是丹參的脂溶性成分之一,主要分布于丹參根皮部，本質(zhì)部有少量分布。其磺化產(chǎn)物丹參酮ⅡA 磺酸鈉易溶于水，在臨床上被廣泛用于冠心病、心肌梗死等疾病的輔助治療。但是丹參酮ⅡA 磺酸鈉對于人心肌細(xì)胞Iks 電流的作用目前尚不清楚。 目的與方法 第一部分：將分別編碼Iks 通道α亞單位及β亞單位的KCNQ1、KCNE1 基因共轉(zhuǎn)染HEK293 細(xì)胞，潮霉素B 篩選，電生理學(xué)及

3、藥理學(xué)方法鑒定，觀察hKCNQ1/hKCNE1 通道的電生理學(xué)特性和藥理學(xué)特性與野生型人心肌細(xì)胞Iks通道是否相似。 第二部分：主要運(yùn)用膜片鉗技術(shù)，探討丹參酮ⅡA 磺酸鈉對于穩(wěn)定表達(dá)的人心肌細(xì)胞Iks 電流的作用、對Iks 電流激活曲線的影響以及對其激活和去激活時間的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 第一部分： 1．穩(wěn)定表達(dá)hKCNQ1/hKCNE1 基因的細(xì)胞上可記錄到緩慢激活、無明顯失活、具有明顯尾電流的外向電流，該

4、電流激活電壓大于40mV，具有明顯的電壓依賴性；在未轉(zhuǎn)染hKCNQ1/hKCNE1 基因的HEK 293 細(xì)胞上只記錄到很小的背景電流。 2．細(xì)胞外鉀離子濃度越大，反轉(zhuǎn)電位負(fù)值越大，表明hKCNQ1/hKCNE1 電流主要是通道對鉀離子通透引起。 3．選擇性Iks通道阻斷劑Chromanol 293B 對hKCNQ1/hKCNE1 電流具有明顯的、可逆的抑制作用，其IC50（+40 mV）為9.1 μmol/L。

5、 4．無鉀細(xì)胞外液能顯著增加hKCNQ1/hKCNE1 電流，在去極化刺激為+40 mV時增加幅度為(28.6 ± 2.0)％ ( P ＜0.01, n = 8)。 第二部分：1．丹參酮ⅡA 磺酸鈉可以增加穩(wěn)定表達(dá)的人心肌細(xì)胞Iks 電流的幅度，其作用呈濃度依賴并且可逆，EC50（＋40mV）為64.5μmol/L。 2．30μmol/L 的丹參酮ⅡA 磺酸鈉使Iks 電流激活曲線左移而對斜率無影響，30μmol/L 的

6、丹參酮ⅡA 磺酸鈉和對照組的V0.5 分別為（16.1±1.2）mV、（24.1±1.9）mV(P＜0.05,n= 7)； S 分別為19.1±2.3、17.6 ± 2.4 (P＞0.05,n=7)。 3．丹參酮ⅡA 磺酸鈉減小Iks 電流的激活時間常數(shù)（－20 mV 至+40mV，n=7，P＜0.05），增大Iks電流的去激活時間常數(shù)（－90 mV 至－40mV，n=7，P＜0.05）。 結(jié)論 第一部分：已經(jīng)成