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文檔簡介
1、腦血管疾病(Cerebrovascular Diseases,CVD)是神經(jīng)系統(tǒng)疾病中最為常見和多發(fā)的疾病,近年來已成為全球人口死亡和致殘的首要原因,嚴重威脅人類的健康和生命安全。其中,急性缺血性腦卒中(腦梗死)是最常見的腦卒中類型,約占全部腦卒中病例的60%~80%。即使在存活的腦卒中患者中,仍有大部分存在不同程度的神經(jīng)功能障礙,導致不同程度的殘疾,給家庭和社會帶來沉重的負擔。
丹參(SalviaMiltiorrhza)是雙
2、子葉植物唇形科,傳統(tǒng)中醫(yī)常用的活血化瘀藥物,在我國傳統(tǒng)醫(yī)藥領域應用已有二千多年歷史。根據(jù)我國傳統(tǒng)中醫(yī)理論,丹參具有活血調(diào)經(jīng)、祛瘀止痛、涼血消癰、除煩安神等功效。20世紀30年代至今,研究者對丹參的有效成分及其藥理作用做了充分的研究。丹參酮ⅡA為丹參中分離的二萜醌類化合物,是丹參的主要有效成分。丹參酮ⅡA磺酸鈉(簡稱DS-201)為脂溶性丹參酮ⅡA,經(jīng)磺化而得到的水溶性物質(zhì)。
丹參酮ⅡA作為中藥有效成分單體制劑,在我國面市已數(shù)十
3、年,廣泛用于治療心肺系統(tǒng)疾病、各類皮膚及淺表組織炎癥。研究證明,丹參酮ⅡA能有效改善冠狀動脈側(cè)支循環(huán),減小梗死心肌面積,同時可解除微血管痙攣,增加微循環(huán)流速和流量,消除局部靜脈血液淤滯,改善組織細胞缺血缺氧所致的代謝障礙,在肺部疾病中可抑制肺組織纖維化,減少肺組織炎性細胞浸潤,增加肺毛細血管血流量。
近年通過大量研究,丹參酮ⅡA在腦血管疾病領域的應用逐漸受到關(guān)注。本實驗意在研究其對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用。
研
4、究目的:
本實驗研究丹參酮ⅡA磺酸鈉對局灶性腦缺血再灌注損傷模型大鼠的神經(jīng)保護作用,探討其部分機制。
研究方法:
1、實驗動物分組清潔級SD大鼠40只,體重202-305(247.57±32.09)g,按隨機數(shù)字表法分為四組,分別為假手術(shù)組(Shamoperated)、局灶性腦缺血模型組(簡稱:模型組,Model)、丹參酮ⅡA磺酸鈉預處理組(簡稱:預處理組,Pretreatment)、丹參酮ⅡA磺酸鈉治療組
5、(簡稱:治療組,Treatment),每組10只大鼠。
2、動物模型制備模型組、預處理組和治療組采用目前公認的改良Longa法,放置線栓制作大腦中動脈閉塞模型(Middlecerebralarteryocclusion,MCAO),2小時后拔出線栓,形成再灌注,獲得實驗所需要的缺血再灌注損傷模型。假手術(shù)組僅做切皮、分離血管,不放置線栓。
3、給藥方法假手術(shù)組、模型組大鼠分別在MCAO造模手術(shù)前30分鐘,腹腔注射生理鹽
6、水2ml;預處理組和治療組大鼠給予腹腔注射丹參酮ⅡA磺酸鈉原液30mg/kg,預處理組大鼠在MCAO造模手術(shù)前30分鐘注射;治療組在MCAO造模手術(shù)后2小時,開放血流時注射。
4、腦梗死體積百分比計算大鼠處死后,腦組織薄片,進行TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)染色,數(shù)碼相機拍照染色標本,使用計算機圖像分析軟件(HPIAS—1000)計算梗死區(qū)腦組織比例。
5、腦含水量計算實驗大鼠于再灌注后24h處死,取出完整大
7、腦,留梗死半球,電子精密天平測濕重,再將標本置于100℃電熱恒溫干燥箱至恒重后測干重。計算腦含水量。
6、神經(jīng)功能評分應用ZeaLonga神經(jīng)功能評分法,于再灌注后12小時、24小時分別進行神經(jīng)功能評分,評價大鼠神經(jīng)功能缺失狀況。評分標準:無神經(jīng)功能損傷癥狀為0分;不能伸展對側(cè)前爪為1分;向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)為2分;向?qū)?cè)傾倒3分;無自主活動伴意識障礙為4分;死亡為5分。得分越高,提示神經(jīng)功能損傷越嚴重。
7、TNF-α含量測
8、定采用雙夾心酶聯(lián)免疫吸附法對各組大鼠血清中TNF-α進行定量分析。
8、統(tǒng)計學處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。實驗計量數(shù)據(jù)用均數(shù)標準差(表示,多組比較采用單因素方差分析,兩組間比較采用兩樣本均數(shù)t檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
結(jié)果:
1、梗死體積:TTC染色后,假手術(shù)組未見明顯梗死灶,其余各組均有不同程度的白色梗死灶。經(jīng)測量梗死體積并進行統(tǒng)計學分析,各組差異有顯著意義,
9、F=7.29,P<0.01;進一步配對比較,模型組高于預處理組和治療組,t=13.70、11.26,P<0.01。
2、腦含水量:各組腦含水量比較,差異有顯著意義,F=8.19,P<0.01;進一步配對比較,模型組腦含水量高于預處理組和治療組,t=3.13、2.97,P<0.05。
3、神經(jīng)功能:除假手術(shù)組外,其余各組不同時間點均可見不同程度的神經(jīng)功能缺損。評分比較,差異有顯著意義,術(shù)后12小時,F=4.72,P<0
10、.05;術(shù)后24小時,F=9.72,P<0.01;配對比較,模型組不同時間點神經(jīng)功能評分高于預處理組和治療組t=2.74、2.82、3.34、2.86,P<0.05。
4、血清TNF-α:各組血清TNF-α含量差異有顯著意義,F=3.96,P<0.05;配對比較,模型組高于預處理組和治療組t=2.78、2.12,P<0.05。
結(jié)論:
丹參酮ⅡA磺酸鈉可降低局灶性腦缺血再灌注模型大鼠的腦梗死體積百分比、腦含
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