樹(shù)突狀細(xì)胞介導(dǎo)的Th1-Th2失衡在子癇前期發(fā)病機(jī)理中的研究.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)外周血及子宮蛻膜中樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)亞群和對(duì)分離的單個(gè)核細(xì)胞來(lái)源的DCs進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，探討DCs亞群和表型在正常妊娠和子癇前期患者間的變化，及與Thl/Th2型反應(yīng)的關(guān)系。 方法：分別選取正常妊娠孕婦、子癇前期患者和正常未孕婦女作為研究對(duì)象，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)其外周血樹(shù)突狀細(xì)胞及其髓樣(MDC)和淋巴樣(PDC)亞群，比較其數(shù)量和比值在妊娠前、妊娠各個(gè)時(shí)期及子癇前期患者的變化，并與Th1/Th2型細(xì)胞因子的含量

2、進(jìn)行比較。采用免疫組化方法對(duì)子宮蛻膜DCs進(jìn)行定位，分離正常早期妊娠和足月妊娠婦女以及子癇前期患者子宮蛻膜的單個(gè)核細(xì)胞，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)其樹(shù)突狀細(xì)胞及其亞群，比較其數(shù)量和比值在妊娠各個(gè)時(shí)期及子癇前期患者的變化，并與外周血相比較。同時(shí)對(duì)分離的外周血和子宮蛻膜的單個(gè)核細(xì)胞，采用rhGM-CSF+rhlL-4進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，觀察DCs在誘導(dǎo)成熟過(guò)程中其形態(tài)、表型和功能的變化，并在妊娠前后、妊娠各個(gè)時(shí)期和子癇前期之間進(jìn)行比較。 結(jié)果：

3、1.外周血DC數(shù)量和亞群及Thl/Th2型細(xì)胞因子的變化：與妊娠前相比，早孕期MDC和PDC數(shù)量有所減少，MDC/PDC比值輕度升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與正常妊娠早期和晚期相比，妊娠中期MDC和PDC數(shù)量明顯減少，MDC/PDC比值顯著升高，但妊娠早、晚期相比無(wú)顯著差異；與正常晚期妊娠婦女相比較，子癇前期患者PDC數(shù)量減少，MDC數(shù)量改變不明顯，MDC/PDC比值升高，兩組相比差異顯著。與未孕時(shí)期相比，早孕期IL-2顯著降低，IL-4、I

4、L-10顯著升高，IFN-γ輕度降低；妊娠期間IL-2和IL-10隨妊娠進(jìn)展顯著升高，IL-4在妊娠中期輕度降低，但與其他孕周相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，IFN-γ在妊娠期間變化不明顯；與正常晚期妊娠婦女相比較，子癇前期患者Th1型細(xì)胞因子IL-2含量增加，IFN-Y無(wú)顯著差異，Th2型細(xì)胞因子IL-4減少，但I(xiàn)L-10顯著升高，IL-2/IL-10比值降低、IFN-γ/IL-4比值升高。2-子宮蛻膜中DC數(shù)量和亞群的變化：免疫組織化學(xué)染色顯示早

5、期妊娠和晚期妊娠子宮蛻膜中均有CD205陽(yáng)性DCs存在，數(shù)量稀少，主要分布于子宮蛻膜與滋養(yǎng)細(xì)胞層交界處和子宮蛻膜血管周?chē)?，約占整個(gè)單個(gè)核細(xì)胞的1.5﹪左右；子宮蛻膜中以CD11c陽(yáng)性的MDC為主，CD123陽(yáng)性的PDC含量很少；流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)顯示，早期妊娠、足月妊娠以及子癇前期患者蛻膜中DCs、MDC均較外周血中含量明顯多，PDC含量差異不顯著；將分離的蛻膜單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，可誘導(dǎo)出成熟的具有典型樹(shù)枝狀或毛刺樣突起的成熟DCs，并

6、且具有刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖和產(chǎn)生T淋巴細(xì)胞因子的能力。3.rhGM-CSF+rhlL-4誘導(dǎo)下外周血和子宮蛻膜中DCs表型的變化：對(duì)妊娠前、妊娠期和子癇前期患者外周血DCs進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，結(jié)果顯示誘導(dǎo)成熟的DCs不表達(dá)白細(xì)胞混合抗原Lineage，而高表達(dá)黏附分子CD80、CD83、CD86和HLA-DR，與妊娠前相比，妊娠期DCs表面C1380、CD83、CD86和HLA-DR表達(dá)量明顯減少，而子癇前期患者上述黏附分子表達(dá)量明顯升高

7、；DCs成熟后檢測(cè)其培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子發(fā)現(xiàn)，正常妊娠孕婦產(chǎn)生的IL-10較妊娠前婦女和子癇前期患者增加，而產(chǎn)生的IL-12減少：誘導(dǎo)成熟后DCs均表達(dá)CD80和CD86 mRNA，子癇前期患者表達(dá)量較正常妊娠顯著增加：進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)發(fā)現(xiàn)，正常妊娠孕婦的DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力較妊娠前減弱，混合培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生的IFN-γ明顯減少，IL-4顯著增加，而子癇前期患者的DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力增強(qiáng)，混合培養(yǎng)上清液中IFN-γ

8、顯著增加，IL-4減少。對(duì)正常妊娠早期、足月妊娠和子癇前期患者子宮蛻膜的DCs進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，子癇前期患者蛻膜DCs表面CD80、CD83、CD86和HLA-DR表達(dá)量較正常早期和足月妊娠顯著增加，刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)，產(chǎn)生的IL-12增加，IL-10減少。 結(jié)論：1．生理妊娠三個(gè)時(shí)期外周血中Th1/Th2細(xì)胞因子含量呈現(xiàn)Th2型為主的趨勢(shì)，子癇前期患者呈現(xiàn)Th1型為主的趨勢(shì)； 2．DCs在生理妊娠的不同階

9、段其數(shù)量和亞群發(fā)生變化，與生理妊娠中的Th2反應(yīng)一致，子癇前期患者出現(xiàn)PDC減少和MDC/PDC比值升高現(xiàn)象，并與Th1反應(yīng)一致。 3-子宮蛻膜中存在DCs，并與外周血一樣，可由單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)而來(lái)，且具有抗原提呈能力。 4．妊娠子宮蛻膜與外周血DCs在數(shù)量和亞群的分布上存在差異，正常妊娠蛻膜中也呈現(xiàn)Th2型為主的免疫耐受狀態(tài)，與DC亞群分布一致； 5-子癇前期蛻膜中DCs和MDC含量顯著增加，呈現(xiàn)Thl型為主的免