人運動神經(jīng)元生存蛋白Tudor功能域片段的克隆，表達(dá).pdf

1、目的：構(gòu)建含有人SMN Tudor基因片段的原核表達(dá)質(zhì)粒，并在大腸桿菌中大量表達(dá)，從而與 p100 Tudor 片段結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行比較。 方法：利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法，擴(kuò)增出人SMN Tudor基因序列，并與原核表達(dá)載體pGEX-4T-1連接形成重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至作為質(zhì)粒的宿主菌大腸桿菌BL21株中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá)并用還原型谷胱甘肽 S 轉(zhuǎn)移酶特異性結(jié)合球珠純化融合蛋白。用同樣的方法表達(dá)p100 Tudor蛋白片

2、段融合蛋白。SMN Tudor融合蛋白與p100 Tudor融合蛋白分別與HeLa細(xì)胞核裂解液中蛋白結(jié)合，并進(jìn)行比較。 結(jié)果：PCR法獲得SIVlN Tudor基因序列，長度為183bp，成功構(gòu)建了表達(dá)載體pGEX的重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒pGEX-4T-SMN Tudor經(jīng)PCR鑒定，酶切鑒定和測序后在大腸桿菌BL21株中成功表達(dá)GST-SMN Tudor融合蛋白。通過比較可以看出p100 Tudor片段與SMN Tudor片段結(jié)合