2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:構(gòu)建含有人SMN Tudor基因片段的原核表達(dá)質(zhì)粒,并在大腸桿菌中大量表達(dá),從而與 p100 Tudor 片段結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行比較。 方法:利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法,擴(kuò)增出人SMN Tudor基因序列,并與原核表達(dá)載體pGEX-4T-1連接形成重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至作為質(zhì)粒的宿主菌大腸桿菌BL21株中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá)并用還原型谷胱甘肽 S 轉(zhuǎn)移酶特異性結(jié)合球珠純化融合蛋白。用同樣的方法表達(dá)p100 Tudor蛋白片

2、段融合蛋白。SMN Tudor融合蛋白與p100 Tudor融合蛋白分別與HeLa細(xì)胞核裂解液中蛋白結(jié)合,并進(jìn)行比較。 結(jié)果:PCR法獲得SIVlN Tudor基因序列,長(zhǎng)度為183bp,成功構(gòu)建了表達(dá)載體pGEX的重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒pGEX-4T-SMN Tudor經(jīng)PCR鑒定,酶切鑒定和測(cè)序后在大腸桿菌BL21株中成功表達(dá)GST-SMN Tudor融合蛋白。通過(guò)比較可以看出p100 Tudor片段與SMN Tudor片段結(jié)合

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