運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷機(jī)制及保護(hù)對(duì)策研究.pdf

1、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元變性是多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的重要病理過(guò)程，由于運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的不可再生性，嚴(yán)重的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷造成的運(yùn)動(dòng)功能喪失帶來(lái)永久的痛苦和家庭負(fù)擔(dān)。運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷有急性損傷和慢性損傷兩種。脊髓損傷(SCI)是急性損傷的代表性疾病，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病尤其是肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)則以慢性進(jìn)行性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元變性為主要病理特點(diǎn)。急性創(chuàng)傷性脊髓損傷的病理過(guò)程包括兩方面：一是最初的機(jī)械損傷，二是創(chuàng)傷后繼發(fā)的遲發(fā)性損害。包括血管的異常、缺血再灌注、谷氨酸興奮毒、

2、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)等。肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)的病因推測(cè)有以下幾方面：1)遺傳環(huán)境因素。2)谷氨酸興奮毒作用。3)氧化應(yīng)激。4)免疫因素。5)營(yíng)養(yǎng)因子失衡。但何為ALS發(fā)病的啟動(dòng)因素尚不明確。縱觀運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元急、慢性變性的病理過(guò)程，我們看到，盡管不同疾病造成的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷的直接致病因素不同，但谷氨酸的興奮毒作用和氧化應(yīng)激的作用都不容忽視。 對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元急、慢性變性的體外研究主要應(yīng)用運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元單細(xì)胞培養(yǎng)(包括純化的原代運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元培

3、養(yǎng)、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元樣的細(xì)胞株(NSC34)培養(yǎng))、器官型脊髓、腦薄片培養(yǎng)模型。對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元急、慢性變性的在體研究，不同的損傷因素造成不同的動(dòng)物模型，壓迫、軸索斷傷等都能在動(dòng)物體內(nèi)模擬急性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元變性。因?yàn)閿y帶突變的人的SOD，(hmSOD<,1>)基因的G93A鼠運(yùn)動(dòng)行為及病理變化與人類ALS極為相似，所以針對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元慢性變性的研究主要聚焦在G93A轉(zhuǎn)基因小鼠模型上。 對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷的研究最根本的目的是能阻止其變性的過(guò)程，最大

4、可能地保存運(yùn)動(dòng)功能。然而因?yàn)檫\(yùn)動(dòng)神經(jīng)元在體內(nèi)的不可代替性和不可再生性，使對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的研究步履維艱。 本論文共分七部分： 第一部分，建立大鼠脊髓薄片的培養(yǎng)方法，判斷SMI-32對(duì)體內(nèi)、外運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元標(biāo)記的特異性。 第二部分，尋找由切割造成的脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元丟失的原因，應(yīng)用二相酶誘導(dǎo)劑干預(yù)，觀察其有無(wú)保護(hù)作用并探討機(jī)制。 第三部分利用脊髓片的器官培養(yǎng)技術(shù)，用谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑蘇一羥天冬氨酸(THA)制作選擇型脊

5、髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷的器官型培養(yǎng)模型，應(yīng)用二相酶誘導(dǎo)劑干預(yù)，觀察其有無(wú)保護(hù)作用并探討機(jī)制。 第四部分，根據(jù)谷氨酸的興奮毒機(jī)制，利用谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑蘇一羥天冬氨酸(THA)制作運(yùn)動(dòng)皮層大錐體細(xì)胞損傷的腦片培養(yǎng)模型，應(yīng)用二相酶誘導(dǎo)劑干預(yù)，觀察其有無(wú)保護(hù)作用并探討機(jī)制。 第五部分，根據(jù)谷氨酸的興奮毒機(jī)制，利用谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑蘇一羥天冬氨酸(THA)制作運(yùn)動(dòng)皮層大錐體細(xì)胞和脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷模型，應(yīng)用頭孢曲松(Cef)干預(yù)，

6、觀察其有無(wú)保護(hù)作用。 第六部分，根據(jù)谷氨酸的興奮毒機(jī)制，利用谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑蘇一羥天冬氨酸(THA)制作運(yùn)動(dòng)皮層大錐體細(xì)胞和脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷模型，應(yīng)用胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-1)干預(yù)，觀察其有無(wú)保護(hù)作用。 第七部分，對(duì)引進(jìn)的G93A轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行飼養(yǎng)、繁殖、鑒定和行為學(xué)評(píng)測(cè)。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)，我們?cè)噲D揭示急、慢性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元變性的一些相關(guān)因素，探討谷氨酸興奮毒作用和氧化應(yīng)激在運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷中的作用和相互影響，觀察二相酶誘