巨噬細胞調(diào)控心梗后交感神經(jīng)再生的作用和分子機制.pdf

1、第一部分阻斷Notch信號通路改善心梗大鼠交感神經(jīng)過度增生，并增加M2型巨噬細胞的數(shù)量
　　研究背景:
　　心源性猝死(sudden cardiac death，SCD)是MI的常見并發(fā)癥，每年每10萬人中平均有0.46-3.7人死于SCD。在臨床實踐中，在MI早期，患者易反復(fù)發(fā)作室速(VT)、室顫(VF)，亦稱為“交感電風(fēng)暴”，其發(fā)生與交感神經(jīng)過度增生和激活密切相關(guān)，盡管抗心律失常藥物胺碘酮、ICD植入術(shù)和射頻消融術(shù)在MI

2、后電風(fēng)暴中廣泛應(yīng)用，仍存在心律失常反復(fù)、不能終止的現(xiàn)象。在犬類及嚙齒類動物實驗中，針對交感神經(jīng)的左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)阻滯、腎交感神經(jīng)切除術(shù)及迷走神經(jīng)刺激術(shù)在改善MI后室性心律失常發(fā)作中效果顯著，但臨床樣本少、缺乏有力證據(jù)。目前，交感神經(jīng)過度增生為特點的心臟自主神經(jīng)重構(gòu)成為MI早期VT、VF發(fā)作的重要元素，所以，探討MI后交感神經(jīng)過度增生的分子機制可為臨床MI后惡性心律失常的防治提供新的理論依據(jù)和治療靶點。
　　研究發(fā)現(xiàn)，炎癥反應(yīng)在外周神

3、經(jīng)損傷和再生中起到重要作用。這一發(fā)現(xiàn)為自主神經(jīng)重構(gòu)的防治打開了新的視窗。炎癥介導(dǎo)的心肌梗死(MI)周邊交感神經(jīng)增生與心律失常致心源性猝死的發(fā)病緊密相關(guān)，有研究表明，MI處浸潤的巨噬細胞通過產(chǎn)生神經(jīng)生長因子(NGF)成為連接炎癥反應(yīng)和交感神經(jīng)再生的紐帶，但具體的調(diào)控機制尚不明確。巨噬細胞調(diào)控NGF的機制尚不明確。巨噬細胞主要分為促炎的M1型和抑炎的M2型。在對于MI后心肌重構(gòu)的研究中發(fā)現(xiàn)，巨噬細胞的表型和功能連續(xù)變化。在MI急性炎癥期，M

4、1型巨噬細胞大量浸潤，并在MI3天達到高峰;5天后，M2型巨噬細胞逐漸增多，并于MI7天達高峰，此后巨噬細胞逐漸消退。進一步探尋MI后調(diào)控巨噬細胞的表型和功能的上游分子可為心梗后自主神經(jīng)重構(gòu)。Notch信號在MI后炎癥細胞中過度激活，同時Xu等在Nature communication中的最新研究發(fā)現(xiàn)，Notch可調(diào)控巨噬細胞的表型轉(zhuǎn)變，參與巨噬細胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)調(diào)控，但其在MI后交感神經(jīng)重構(gòu)中的作用未有報道。因此我們猜測，Notch信

5、號的激活參與MI后巨噬細胞表型轉(zhuǎn)變，這一過程可通過影響NGF的釋放參與MI后交感神經(jīng)重構(gòu)的調(diào)控過程。
　　研究目的:
　　我們旨在探究Notch信號在MI后的激活狀態(tài)，Notch信號對MI后巨噬細胞及其主導(dǎo)的炎癥反應(yīng)影響，最終探討Notch信號對心臟交感神經(jīng)再生的影響和機制。
　　研究方法:
　　流程一
　　實驗大鼠分為以下四組:Ⅰ，假手術(shù)+DMSO組:予大鼠冠狀動脈前降支穿線不結(jié)扎，DMSO尾靜脈注射，每

6、次劑量50ul，造模前半小時首次注射，后每天一次直至取材;Ⅱ，假手術(shù)+ DAPT組(N-N-(3,5-difluorophenacetyl-1-alanyl)-S-phenylglycine-t-butyl ester）:手術(shù)及DAPT注射方法同組Ⅰ， DAPT單次劑量10mg/kg，溶于50ulDMSO中;Ⅲ，MI+DAPT組:予大鼠冠狀動脈結(jié)扎誘發(fā)MI，DAPT注射及頻次同前，注射方法同組Ⅱ;Ⅳ，MI+DMSO組:MI造模及DMSO

7、注射方法同組Ⅲ。MI后三天，分離心肌梗死區(qū)巨噬細胞，梗死區(qū)心肌，梗死灶周心肌，梗死遠端心肌及空白心肌行RT-PCR檢測Notch信號通路相關(guān)蛋白(NICD1、Hes1)的mRNA表達;同時采用免疫熒光和Western blot分別定位和定量梗死心臟NICD1的表達，同時行CD68、CD163及CD68、Arg1熒光雙染及RT-PCR判定巨噬細胞表型;Elisa檢測血漿中TNF-α，IL-1β的水平。MI后7天，利用心室壓力容積系統(tǒng)測定血