基于iTRAQ技術(shù)的羅非魚脂肪肝差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的:在羅非魚飼養(yǎng)階段中脂肪肝病頻頻發(fā)生，極大的阻礙了羅非魚養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展步伐，本實(shí)驗(yàn)通過增加日投飼率建立羅非魚脂肪肝病模型，應(yīng)用iTRAQ聯(lián)合多維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(LC-MS/MS)篩選和鑒定健康羅非魚與脂肪肝病羅非魚之間的肝臟差異表達(dá)蛋白，深入分析肝臟脂肪病變過程中各差異蛋白對(duì)脂類代謝的影響，為檢測(cè)與防治羅非魚脂肪肝建立新思路。
　　方法:根據(jù)前期研究，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)組B日投飼率為體重10％，對(duì)照組A為6％，飼養(yǎng)八周后通過檢測(cè)肝指

2、數(shù)、肝脂含量、相關(guān)肝生化指標(biāo)和肝組織切片驗(yàn)證羅非魚脂肪肝病模型的建立。每組取36尾魚，將36份肝臟樣品等量混合為一組，經(jīng)蛋白酶切后用iTRAQ試劑標(biāo)記;應(yīng)用LC-MS/MS技術(shù)分離肝臟蛋白，并用軟件ProteinPilotTM Software5.0(AB Sciex)進(jìn)行蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)檢索，得到可信的具有定量信息的蛋白，在錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率(falsediscovery rate) FDR＜0.01的基礎(chǔ)上，設(shè)定兩組間表達(dá)量比值Ratio(B/A

3、)＞1.3或Ratio(B/A)＜0.77為篩選差異表達(dá)蛋白上調(diào)或下調(diào)的閾值，將篩選到的差異蛋白進(jìn)行GO分類注釋、KEGG Pathway分析，在上述分析結(jié)果的基礎(chǔ)上結(jié)合查閱文獻(xiàn)篩選得到與脂肪肝形成相關(guān)的目的蛋白。
　　結(jié)果:1.3倍作為閾值篩選共獲得差異蛋白166個(gè)，其中上調(diào)蛋白78個(gè)，1.3倍下調(diào)蛋白88個(gè);這些蛋白參與了轉(zhuǎn)運(yùn)、小分子代謝、碳水化合物代謝、脂質(zhì)代謝、脂質(zhì)結(jié)合、生物合成、分解代謝、應(yīng)激反應(yīng)等37個(gè)生物過程，其中與

4、脂肪肝病變密切相關(guān)的目的蛋白有29個(gè)，其中上調(diào)蛋白有RAC1（C3相關(guān)肉毒素基質(zhì)）、ATP-檸檬酸合成酶、丙酮酸脫氫酶復(fù)合體的乙酰轉(zhuǎn)移酶的組成部分、L-FABP（肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白）、脂滴包被蛋白家族成員2(ADRP)、SOD（超氧化物歧化酶）、ACSL（長(zhǎng)鏈脂酰CoA合成酶）、Trx（硫氧還蛋白）、ICDH（異檸檬酸脫氫酶）、GP（α-1.4葡聚糖磷酸化酶）、GLUT2（易化性單糖轉(zhuǎn)運(yùn)家族成員2）、GST（谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶A型）和

5、線粒體多功能酶亞基α(HADHA);下調(diào)的蛋白有COX4（細(xì)胞色素氧化酶4）、細(xì)胞質(zhì)HMG CoA合成酶、HL（肝酯酶）、CYP7A1（7-α-膽固醇單氧酶）、APOA4b（載脂蛋白A4b）、APOA4a(載脂蛋白A4a)、APOB100（載脂蛋白B-100）、LCP（瘦素受體蛋白）、CLU（叢集素）、CYP51（羊毛甾醇14α-去甲基化酶）、SPARC蛋白、VTG（卵黃蛋白原;卵黃生成素）、補(bǔ)體B、補(bǔ)體C5、FPPS（法尼基焦磷酸合成