基于iTRAQ技術的羅非魚脂肪肝差異蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、目的:在羅非魚飼養(yǎng)階段中脂肪肝病頻頻發(fā)生，極大的阻礙了羅非魚養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展步伐，本實驗通過增加日投飼率建立羅非魚脂肪肝病模型，應用iTRAQ聯(lián)合多維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(LC-MS/MS)篩選和鑒定健康羅非魚與脂肪肝病羅非魚之間的肝臟差異表達蛋白，深入分析肝臟脂肪病變過程中各差異蛋白對脂類代謝的影響，為檢測與防治羅非魚脂肪肝建立新思路。
　　方法:根據(jù)前期研究，設計實驗組B日投飼率為體重10％，對照組A為6％，飼養(yǎng)八周后通過檢測肝指

2、數(shù)、肝脂含量、相關肝生化指標和肝組織切片驗證羅非魚脂肪肝病模型的建立。每組取36尾魚，將36份肝臟樣品等量混合為一組，經(jīng)蛋白酶切后用iTRAQ試劑標記;應用LC-MS/MS技術分離肝臟蛋白，并用軟件ProteinPilotTM Software5.0(AB Sciex)進行蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)檢索，得到可信的具有定量信息的蛋白，在錯誤發(fā)現(xiàn)率(falsediscovery rate) FDR＜0.01的基礎上，設定兩組間表達量比值Ratio(B/A

3、)＞1.3或Ratio(B/A)＜0.77為篩選差異表達蛋白上調(diào)或下調(diào)的閾值，將篩選到的差異蛋白進行GO分類注釋、KEGG Pathway分析，在上述分析結(jié)果的基礎上結(jié)合查閱文獻篩選得到與脂肪肝形成相關的目的蛋白。
　　結(jié)果:1.3倍作為閾值篩選共獲得差異蛋白166個，其中上調(diào)蛋白78個，1.3倍下調(diào)蛋白88個;這些蛋白參與了轉(zhuǎn)運、小分子代謝、碳水化合物代謝、脂質(zhì)代謝、脂質(zhì)結(jié)合、生物合成、分解代謝、應激反應等37個生物過程，其中與

4、脂肪肝病變密切相關的目的蛋白有29個，其中上調(diào)蛋白有RAC1（C3相關肉毒素基質(zhì)）、ATP-檸檬酸合成酶、丙酮酸脫氫酶復合體的乙酰轉(zhuǎn)移酶的組成部分、L-FABP（肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白）、脂滴包被蛋白家族成員2(ADRP)、SOD（超氧化物歧化酶）、ACSL（長鏈脂酰CoA合成酶）、Trx（硫氧還蛋白）、ICDH（異檸檬酸脫氫酶）、GP（α-1.4葡聚糖磷酸化酶）、GLUT2（易化性單糖轉(zhuǎn)運家族成員2）、GST（谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶A型）和

5、線粒體多功能酶亞基α(HADHA);下調(diào)的蛋白有COX4（細胞色素氧化酶4）、細胞質(zhì)HMG CoA合成酶、HL（肝酯酶）、CYP7A1（7-α-膽固醇單氧酶）、APOA4b（載脂蛋白A4b）、APOA4a(載脂蛋白A4a)、APOB100（載脂蛋白B-100）、LCP（瘦素受體蛋白）、CLU（叢集素）、CYP51（羊毛甾醇14α-去甲基化酶）、SPARC蛋白、VTG（卵黃蛋白原;卵黃生成素）、補體B、補體C5、FPPS（法尼基焦磷酸合成