基于iTRAQ技術(shù)的結(jié)核性攣縮膀胱及狹窄輸尿管組織蛋白質(zhì)組學(xué)研究及差異蛋白驗(yàn)證.pdf

1、目的：
　　本研究通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選正常膀胱組織與結(jié)核性攣縮膀胱組織、正常輸尿管組織與結(jié)核性狹窄輸尿管組織標(biāo)本之間共有的差異蛋白，查閱文獻(xiàn)并從差異蛋白中篩選可能與膀胱及輸尿管纖維化病變發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)蛋白，通過蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)進(jìn)行差異蛋白驗(yàn)證，為膀胱攣縮及輸尿管狹窄的分級(jí)、診斷、治療提供新的方法及靶點(diǎn)。
　　方法：
　　第一部分：收集2015年1月至2016年12月解放軍309醫(yī)院泌尿外科確診泌尿系結(jié)核患者的攣縮

2、膀胱及狹窄輸尿管組織各2塊；獲取我院同一時(shí)期DCD供者的膀胱及輸尿管組織各2塊作為正常對(duì)照。4種組織混合后用iTRAQ標(biāo)記技術(shù)（相對(duì)和絕對(duì)定量同位素標(biāo)記）聯(lián)合LC-MSMS(液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜)對(duì)各組的總蛋白進(jìn)分析，將在正常膀胱與攣縮膀胱、正常輸尿管與狹窄輸尿管組織中表達(dá)差異在2倍及2倍以上的蛋白質(zhì)定義為差異蛋白，并篩選2組之間共同表達(dá)的差異蛋白。通過Uniprot、DAVID、String、Wego數(shù)據(jù)庫對(duì)共有差異蛋白進(jìn)行功能聚類、細(xì)胞

3、定位、相互作用分析。第二部分：分別選取上述4種組織各6塊，進(jìn)行Masson染色，驗(yàn)證攣縮膀胱、狹窄輸尿管組織膠原纖維的表達(dá)量；從共有的差異蛋白中挑選微纖絲相關(guān)糖蛋白4(MFAP4)和纖維調(diào)節(jié)素（FMOD）進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot）驗(yàn)證。
　　結(jié)果：
　　第一部分：通過蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，在正常膀胱組織與攣縮膀胱組織組共鑒定出188種差異蛋白質(zhì)，正常輸尿管與狹窄輸尿管組共鑒定出130種差異蛋白質(zhì)，2組所共有

4、的差異蛋白質(zhì)48種，其中20種差異蛋白質(zhì)下調(diào)，28種蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)；48種差異蛋白質(zhì)在DAVID數(shù)據(jù)庫中共有28種蛋白質(zhì)被標(biāo)記，這28種蛋白質(zhì)主要涉及17種生物學(xué)過程，5種分子功能途徑和13種細(xì)胞組成；48種蛋白質(zhì)在String數(shù)據(jù)庫中，39種蛋白質(zhì)被檢測(cè)到，共形成3條相互作用網(wǎng)絡(luò)。
　　第二部分：Masson染色提示在攣縮膀胱組織與狹窄輸尿管組織中，肌層可見大量膠原纖維表達(dá)，攣縮膀胱與正常膀胱、狹窄輸尿管與正常輸尿管相比，膠原纖

5、維表達(dá)明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；western blot結(jié)果提示MFAP4、FMOD在攣縮膀胱及狹窄輸尿管中表達(dá)明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1、iTRAQ技術(shù)聯(lián)合LC-MSMS可對(duì)樣本蛋白進(jìn)行定性、定量鑒定，篩選出差異蛋白，并對(duì)蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析；
　　2、纖維調(diào)節(jié)素蛋白(FMOD)在病變組織中表達(dá)上調(diào)，是影響膠原纖維合成的重要因素，與膀胱及輸尿管纖維化關(guān)系密切。
　　3、人微纖絲相關(guān)