氧化苦參堿對(duì)哮喘大鼠細(xì)胞炎性因子IL-17A和IL-10的影響.pdf

1、目的：觀察不同濃度氧化苦參堿（Oxymatrinem，Oxy）刺激哮喘大鼠脾源性單個(gè)核細(xì)胞后IL-17A、IL-10的變化，以探討Oxy對(duì)哮喘的作用機(jī)制。
　　方法：清潔級(jí)健康雌性SD大鼠，40只，按照完全隨機(jī)表，將大鼠分成模型組，低濃度組、中濃度組、高濃度組和對(duì)照組，共計(jì)5組，每組8只，除外對(duì)照組，其他組均以O(shè)VA腹腔注射致敏、霧化激發(fā)；對(duì)照組以等體積的生理鹽水替代OVA溶液，在末次激發(fā)24h之后處死大鼠，并留取標(biāo)本。取左肺組織

2、行HE染色，并觀察其病理學(xué)變化；無(wú)菌條件下研磨大鼠脾臟，制成細(xì)胞懸液，細(xì)胞培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度至2-3×106個(gè)/ml，在低濃度組、中濃度組、高濃度組中加入Oxy溶液，并使其終濃度分別為1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml，而哮喘組和對(duì)照組細(xì)胞懸液中僅加入完全培養(yǎng)液即可；放入培養(yǎng)箱，靜置培養(yǎng)72h后，使用ELISA法測(cè)定各組細(xì)胞上清液中IL-17 A和IL-10的濃度；使用RT-PCR、Western blot測(cè)定各組中IL-1

3、7、IL-10基因及蛋白水平的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、HE染色哮喘模型大鼠的肺組織存在大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，氣管平滑肌明顯增厚，并分泌較多的粘液，出現(xiàn)膠原的沉積。正常對(duì)照組肺泡壁薄且光滑，未見(jiàn)明顯炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，氣管平滑肌均勻，無(wú)增生；證實(shí)哮喘模型復(fù)制成功。
　　2、對(duì)IL-17A的影響經(jīng)ELISA、RT-PCR以及Western blot檢測(cè)IL-17A發(fā)現(xiàn)，高濃度組與對(duì)照組比較，IL-17A的表達(dá)無(wú)差異顯著性(P＞

4、0.05)，其余各組相對(duì)于對(duì)照組則顯著升高(P＜0.05)；低濃度組與哮喘組相比較，無(wú)差異顯著性(P＞0.05)，其他組均較哮喘組有顯著差異(P＜0.05)。各組 IL-17A濃度分別為(385.46±18.73)pg/ml，(382.21±22.24)pg/ml，(349.64±28.67)pg/ml，(231.67±27.65)pg/ml，(228.52±17.92)pg/ml；各組IL-17A mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為(83.28

5、±15.72)，(78.68±9.06)％，(56.12±7.69)，(32.50±6.43)，(29.89±4.71)%；各組IL-17A蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為(49.94±5.43)，(47.33±1.81)，(29.64±2.74)，(11.59±2.96)，(10.49±1.59)。
　　3、對(duì)IL-10的影響經(jīng)ELISA、RT-PCR以及Western blot檢測(cè)IL-10發(fā)現(xiàn)，高濃度組與對(duì)照組比較IL-10的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)意義（P＞0.05），其他組均較對(duì)照組有顯著差異性（P＜0.05）；與哮喘組比較，低濃度組的IL-10無(wú)明顯差異（P＞0.05），其他組均較哮喘組均由明顯差異（P＜0.05）。各組IL-10濃度分別為(36.54±7.88）pg/ml、(37.18±6.95）pg/ml、(54.27±6.35)pg/ml，(86.82±7.69)pg/ml，(87.43±10.95)pg/ml，各組IL-10 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為(3.39±1.

7、86)，(4.01±2.60)，(8.58±1.75)，(25.73±2.59)，(28.73±4.48)；各組IL-10蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為(27.44±4.33)，(30.75±2.52)，(39.44±3.78)，(80.05±4.01)，(83.09±6.85)。
　　結(jié)論：
　　1、 Oxy對(duì)哮喘大鼠IL-17A基因、蛋白表達(dá)，以及外分泌水平均具有抑制作用。
　　2、 Oxy對(duì)哮喘大鼠IL-17A基因、蛋白表