HBV DNA和HCV RNA的全血聯(lián)合快速檢測(cè).pdf

1、該研究通過對(duì)全血標(biāo)本的處理和保存、模板和制備、酶的選擇、和PCR擴(kuò)增條件進(jìn)行探索和優(yōu)化,旨在建立一種快速、經(jīng)濟(jì)、真實(shí)、可靠的HBV DNA和HCV RNA全血聯(lián)合檢測(cè)方法,為最終實(shí)現(xiàn)對(duì)獻(xiàn)血員血液進(jìn)行輸血相關(guān)性病原體的全血聯(lián)合檢測(cè)建立基礎(chǔ).1.使用Catrimox-14能夠有效提取全血HCV RNA模板用于逆轉(zhuǎn)錄-套式PCR.HCV RNA在Catrimox-14溶液中,4℃下至少可以穩(wěn)定保存2周.2.逆轉(zhuǎn)錄混合酶(M-MLV/Taq酶)

2、體系的檢測(cè)靈敏度要高于Tth單酶體系.3.自行設(shè)計(jì)的引物和反應(yīng)體系可以成功地對(duì)HCV RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄-套式PCR的檢測(cè).4.快循環(huán)PCR可應(yīng)用于HCV RNA逆轉(zhuǎn)錄-第一次PCR產(chǎn)物的檢測(cè),縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間.對(duì)全血中制備的HBV DNA模塊,當(dāng)只采用一對(duì)特異性引物進(jìn)行PCR時(shí),快循環(huán)PCR能減少非特異性條帶的出現(xiàn),并增加特異性產(chǎn)物的產(chǎn)量.5.向Catrimox-14溶液中加入適量促DNA沉淀劑可有效沉淀全血中的HBV DNA模板,其效果優(yōu)