實(shí)時(shí)定量PCR快速檢測(cè)人全血中煙曲霉基因組DNA的方法學(xué)研究.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、本研究的目的是建立應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)快速檢測(cè)人全血標(biāo)本中煙曲霉(Aspergillus fumigatus)基因組載量的方法及臨床檢測(cè)應(yīng)用,以推斷腸屏障損傷的后果及療效。
　　 本研究中,選擇煙曲霉基因組多拷貝基因ITS1-5.8S作為靶基因設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan探針,采用QIAamp(R)DNA Blood Mini Kit提取煙曲霉基因組DNA,

2、建立20μl RQ-PCR反應(yīng)體系,對(duì)含有不同載量煙曲霉的模擬人全血標(biāo)本和66份外科發(fā)熱患者全血標(biāo)本進(jìn)行煙曲霉基因組的定量檢測(cè)。結(jié)果顯示本方法的特異性良好,檢測(cè)限為10-1基因組/μl上機(jī)待測(cè)液(即約78 CFU/ml全血)；檢測(cè)靈敏度和特異度分別為99.04％和94.25％,陽性預(yù)告值和陰性預(yù)告值分別為97.63％和97.62％；測(cè)定結(jié)果的平均相對(duì)誤差為(3.67±13.19)％；批內(nèi)及批間平均重復(fù)性變異系數(shù)(CV)分別為(12.38

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