黃酮類化合物與溶菌酶的相互作用及B族維生素的影響.pdf

1、溶菌酶(lysozyme,LYSO)是一種存在于生物體內(nèi)的小分子堿性蛋白質(zhì),能夠和許多外源和內(nèi)源性物質(zhì)結(jié)合,運載多種藥物。黃酮類化合物廣泛分布于植物界中,具有抗菌消炎、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤等多種生物活性,是重要的天然產(chǎn)物之一。研究黃酮類藥物小分子與LYSO的相互作用,在分子水平上探討藥物的作用機(jī)理,尋找發(fā)揮藥效的活性基團(tuán)以及藥代動力學(xué)方面均具有重要意義。B族維生素是人體每天必須補充的營養(yǎng)物質(zhì)之一,研究其對藥物與蛋白質(zhì)相互結(jié)合的影響,可

2、以從實際角度了解日常攝入的營養(yǎng)素對藥物代謝的作用。
　　 目的:研究黃酮類化合物與LYSO相互作用的光譜特征,討論其熒光猝滅機(jī)制、結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點數(shù)、結(jié)合距離、熱力學(xué)參數(shù)、LYSO構(gòu)象變化等信息,并考察B族維生素的加入對黃酮類化合物與LYSO相互作用的影響。
　　 方法:在模擬人體生理pH條件下,采用熒光光譜法和紫外-可見光譜法研究不同溫度下(298 K、304 K和310 K)黃酮化合物(木犀草素、木犀草苷、金合歡素

3、、金合歡苷、黃芩素、黃芩苷)和黃酮醇化合物(槲皮素、槲皮苷、蘆丁、金絲桃苷)分別與LYSO相互作用的光譜特征;討論其熒光猝滅機(jī)制;求算結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點數(shù)和結(jié)合距離;根據(jù)熱力學(xué)方程判斷作用力類型;利用同步熒光光譜法和三維熒光光譜法考察黃酮類化合物對LYSO構(gòu)象的影響;同時分別測定310 K時,維生素B1(VB1)、維生素B2(VB2)、維生素B3(VB3)、維生素B5(VB5)和維生素B6(VB6)的存在對黃酮類化合物與LYSO結(jié)合反應(yīng)

4、的影響,計算結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點數(shù)。
　　 結(jié)果:木犀草素、木犀草苷、金合歡素、金合歡苷、黃芩素、黃芩苷、槲皮素、槲皮苷、蘆丁、金絲桃苷均能與LYSO發(fā)生結(jié)合反應(yīng),使LYSO的內(nèi)源性熒光產(chǎn)生猝滅,猝滅常數(shù)隨溫度的升高而降低。結(jié)合常數(shù)的數(shù)量級為103～106,結(jié)合位點數(shù)都接近于1。十種黃酮類化合物與LYSO的結(jié)合距離分別為4.32、3.83、4.14、4.07、4.22、3.51、4.56、4.07、4.02、4.28nm,均小于7

5、 nm。根據(jù)熱力學(xué)方程,木犀草素、木犀草苷、金合歡素、金合歡苷、槲皮素、槲皮苷、蘆丁、金絲桃苷與LYSO之間△H＜0,△S＜0;黃芩素和黃芩苷與LYSO之間△H＜0,△S＞0。同步熒光和三維熒光光譜表明黃酮類化合物的加入均會使LYSO的吸收峰強(qiáng)度和位移發(fā)生改變。在VB1、VB2、VB3、VB5或VB6的存在下,黃酮類化合物與LYSO的結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點數(shù)均增大,結(jié)合常數(shù)的數(shù)量級達(dá)到105～108,結(jié)合位點數(shù)仍在1左右。另外,B族維生素的

6、存在也影響了LYSO熒光峰紅移或藍(lán)移的程度。
　　 結(jié)論:在模擬人體生理pH條件下,木犀草素、木犀草苷、金合歡素、金合歡苷、黃芩素、黃芩苷、槲皮素、槲皮苷、蘆丁和金絲桃苷對LYSO的內(nèi)源性熒光均能產(chǎn)生靜態(tài)猝滅。供能體(LYSO)和受能體(黃酮類化合物)之間發(fā)生了非輻射能量轉(zhuǎn)移。黃酮類化合物與LYSO結(jié)合生成新的復(fù)合物,木犀草素、木犀草苷、金合歡素、金合歡苷、槲皮素、槲皮苷、蘆丁、金絲桃苷與LYSO之間以氫鍵和范德華力結(jié)合為主,黃