黃酮類化合物（flavonoids）

1、第六章黃酮類化合物 （Flavonoids）,天然藥物化學(xué),基本內(nèi)容,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)特征、分類； 主要性質(zhì)、及酸性與羥基取代位置、數(shù)目的關(guān)系；呈色反應(yīng)在鑒別及結(jié)構(gòu)測定工作中的用途和意義；黃酮類化合物的提取分離原理： 聚酰胺柱色譜分析法（酚類化合物） 梯度PH萃取法（酚酸類化合物） 鉛鹽沉淀法（分子中具有羧酸、鄰二酚羥基及特殊絡(luò)合結(jié)構(gòu)）黃酮類化合物的譜學(xué)特征，UV、1H-NMR、13C-NMR及

2、MS規(guī)律及在結(jié)構(gòu)測定中的重要意義。,基本要求,掌握 黃酮類化合物結(jié)構(gòu)分類，酸性判別及鑒別方法；熟悉 酚酸類化合物提取分離方法的原理和應(yīng)用； 及黃酮類化合物結(jié)構(gòu)鑒定方法和譜學(xué)特征。,本章內(nèi)容,第一節(jié) 緒論第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)第三節(jié) 提取分離方法第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定第五節(jié) 結(jié)構(gòu)研究實例,一、定義： 黃酮類化合物是泛指兩個苯環(huán)通過三碳相互連接而成的一系列化合物。,,,第一節(jié) 緒論,二、生物合成途徑及

3、分類： 桂皮酸－莽草酸途徑,,,,第一節(jié) 緒論,,,,,,查耳酮,,C3-位：有OH 黃酮醇 (Flavonol) 無OH 黃酮 (Flavone)C2－3飽和：二氫黃酮（醇）(Flavanone)C3與B環(huán)相連：異黃酮（Isoflavone）C環(huán)開環(huán)：查耳酮（Chalcone）,,第一節(jié) 緒論,C環(huán)還原：黃烷類,其它類型：花色素類、橙酮類、奧弄類、高異黃酮、 山酮類

4、,例,,第一節(jié) 緒論,槲皮素,柚皮素,(+)兒茶素,大豆素,多以苷的形式存在：O-苷和C-苷苷中常見糖的種類： 單糖：D-葡萄糖，D-半乳糖，D-木糖，L-鼠 李糖，L-阿拉伯糖，D-葡萄糖醛酸 雙糖：槐糖，龍膽二糖，蕓香糖（Rha1— 6Glc），新橙皮糖（Rha1—2Glc）等 三糖：龍膽三糖，槐三糖 酰化糖：2-乙

5、酰葡萄糖，咖啡?；咸烟?,第一節(jié) 緒論,三、存在形式,,本章內(nèi)容,第一節(jié) 緒論第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)第三節(jié) 提取分離方法第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定第五節(jié) 結(jié)構(gòu)研究實例,一、一般性狀形態(tài)：多為結(jié)晶，少數(shù)為無定形粉末。顏色：結(jié)構(gòu)存在交叉共軛體系，因此化合物多有顏色。 黃酮（醇）及其苷：呈黃色-灰黃色 查耳酮：黃-橙色 二氫黃酮（醇）：無色 異黃酮：微黃色 花色素可隨著pH值

6、的變化顏色有所不同： 紅色（pH8.5),,第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng),溶解度,黃酮(醇), 查耳酮：平面型分子二氫黃酮(醇)：非平面型分子花色素：離子,苷元：難溶于水，易溶于乙酸乙酯，乙醚等有 機溶劑中 苷：易溶于水、乙醇、甲醇中，糖鏈越長水溶性越大。,,第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng),,水中溶解度增加,,二、酸堿性,酸性：來源分子中的酚羥基； 可溶于堿性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺。

7、 酸性強弱的比較：取決于羥基的數(shù)目和位置： 7,4′-OH > 7-或4 ′ -OH > 一般OH > 5-OH,,第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng),（可用于提取、分離及鑒定工作）,,7,,5,,3,,4',,3',二、酸堿性,來源：1-位氧原子的未共用電子對，顯微弱的堿性，可與強酸生成（佯）鹽而溶于酸水中。,,第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng),堿性：,,H+,三、顯色反應(yīng),（一）還原反應(yīng)

8、 HCl-Mg 反應(yīng) HCl-Zn 四氫硼鈉（NaBH4) 為（+）的反應(yīng)，顏色多為橙紅-紫紅,,第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng),,應(yīng)用：可用于各類化合物的鑒別,,第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng),三、顯色反應(yīng)（二）絡(luò)合反應(yīng),黃酮類化合物分子結(jié)構(gòu)中多具有下列結(jié)構(gòu)：,可與金屬鹽類試劑產(chǎn)生絡(luò)合反應(yīng) （1）鋯鹽 （4）鎂鹽 （2）鋁鹽

9、 （5）氯化鍶 （3）鉛鹽 （6）三氯化鐵反應(yīng),（1）鋯鹽,第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng),,（2）鋁鹽,（3）鉛鹽,,黃,紅,第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng),,（4）鎂鹽,二氫黃酮(醇), 顯天藍色熒光, 有5-OH更明顯 黃酮(醇)、異黃酮，顯黃~橙、黃~褐色,第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng),,（5）氯化鍶,（三）硼酸顯色反應(yīng)——鑒別5-OH黃酮和2 ′－查耳 酮在酸存在下

10、，生成亮黃色。（四）堿性試劑 NH3蒸氣：顏色加深，可逆；Na2CO3反應(yīng)不可逆。 二氫黃酮遇堿開環(huán)：生成查耳酮，顯橙黃色。 黃酮類有鄰二酚羥基或3，4 ′-二羥基：在OH-中 易氧化。生成由黃色、深紅色至綠棕色沉淀。,,第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng),三、顯色反應(yīng),,HCl-Mg反應(yīng)HCl-Zn反應(yīng)NaBH4反應(yīng)鋯-枸櫞酸反應(yīng)SrCl2反應(yīng)硼酸+草酸反應(yīng)Molish

11、反應(yīng),（+）（+）（-）黃色，加枸櫞酸,褪色（+）（+）黃色（+）,,第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng),練習(xí)：下面的一個化合物可能發(fā)生的反應(yīng),蘆?。╮utin）,,本章內(nèi)容,第一節(jié) 緒論第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)第三節(jié) 提取分離方法第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定第五節(jié) 結(jié)構(gòu)研究實例,一、提取精制 根據(jù)化合物的性質(zhì)，可采取以下提取方法 化合物：極性——溶劑萃取

12、酸性——堿提酸沉 解離性—離子交換 碳粉吸附法,第三節(jié) 提取分離方法,,1. 溶劑萃取法,藥材,,甲醇或乙醇提取，回收醇,浸膏,加水溶解,,水溶液,,分別以不同極性溶劑萃?。ㄊ兔?，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇）,,,石油醚層（小極性）,,氯仿層（苷元）,乙酸乙酯層（大極性苷元及單糖苷）,,,正丁醇層（黃酮苷）,,水層（多糖等）,第三節(jié) 提取分離方法,,原理

13、：酚羥基與堿成鹽，溶于水；加酸后析出。堿：常用Ca(OH)2，或CaO水溶液。優(yōu)點：可使含酚羥基化合物成鹽溶解，另一方面可使含COOH的果膠、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)形成沉淀而除去。注意：堿性不宜過強，以免破壞黃酮母核； 酸化時，酸性不宜過強，pH3~4即可，以免 形成（佯）鹽而溶解。,第三節(jié) 提取分離方法,,2.堿提酸沉法,第三節(jié) 提取分離方法,,2.堿提酸沉法,攪拌下

14、加入石灰乳,,,加水300ml,,槐花米（15g）,調(diào)節(jié)PH8-9,直火加熱,,,保持微沸30min,,雙層濾紙趁熱抽濾,濾液,,殘渣,,在60-70度下，用濃鹽酸調(diào)PH3-4,靜置,實例,操作,第三節(jié) 提取分離方法,,3. 離子交換,原理：酚羥基與堿成鹽，溶于水；采用陰離子交換樹脂交換，加酸后析出，用有機溶劑回流提取。,第三節(jié) 提取分離方法,,4.炭粉吸附法,,藥材甲醇提取物,,分次加入活性炭，攪拌，靜置，檢查上清液有無黃酮反應(yīng)，

15、過濾,,,,濾液,吸附后活性炭粉,,依次用沸水、沸甲醇、7%酚/水、15%酚/醇洗脫,,,,,,沸水,沸甲醇,7%酚/水,15%酚/醇,,濃縮，加乙醚,,,,乙醚層（酚）,水層（黃酮苷）,二、分離,（一）采用各種色譜方法： 硅膠色譜：按極性大小分離，主要分離極性小 和 中等極性的化合物?？捎肅C，PTLC。 聚酰胺色譜：原理：氫鍵吸附 葡聚糖凝膠色

16、譜：原理：分子篩結(jié)合吸附,,第三節(jié) 提取分離方法,聚酰胺：其洗脫順序先—后 (1)苷元相同, 三糖苷>雙糖苷>單糖苷>苷元(2)母核上羥基增加，洗脫速度減慢(3)羥基數(shù)目相同,有締合羥基>無締合羥基(4)不同類型黃酮的洗脫順序： 異黃酮>二氫黃酮（醇）>查耳酮>黃酮>黃酮醇 （芳香核、共軛雙鍵多者吸附力強）,,第三節(jié) 提取分離方法,,第三節(jié) 提取分離方法,習(xí)題：下列黃

17、酮化合物， （1）用聚酰胺柱色譜，含水甲醇梯度洗脫， （2）用硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇梯度洗脫， 分別寫出洗脫順序,第三節(jié) 提取分離方法,,答案：,聚酰胺柱色譜洗脫順序：由先到后 D，E，C，B，A 2. 用硅膠柱色譜洗脫順序：由先到后 A，B，C，D，E,常用型號：Sephadex-G，Sephadex-LH20機理： 分離游離黃酮－－靠

18、吸附作用。吸附程度取決于游離酚羥基數(shù)目，苷元的羥基數(shù)越多, 越難洗脫。 分離黃酮苷－－分子篩起主導(dǎo)作用。在洗脫時，黃酮苷類按分子量由大到小的順序流出柱體。,,葡聚糖凝膠,第三節(jié) 提取分離方法,應(yīng)用：分離酸性強弱不同的黃酮苷元 酸性比較：7,4 ’-OH > 7-或4’-OH > 一般OH > 5-OH,溶于 NaHCO3 Na2CO3 不同濃度的NaOH,樣品,,乙醚,乙醚液,

19、,依次萃取,5%NaHCO35%Na2CO30.2%NaOH4%NaOH,,分別酸化,各部分黃酮,,第三節(jié) 提取分離方法,（二）梯度pH萃取法,,,,,,,,,醋酸鉛沉淀法： 鄰二酚羥基黃酮＋醋酸鉛 沉淀 不具有鄰二酚羥基＋堿式醋酸鉛 沉淀硼酸沉淀法： 鄰二酚羥基＋硼酸 絡(luò)合物溶于水，與其它黃酮分離。,,第三節(jié) 提取分離方法,（三）利用分子中的特定基團,,,,習(xí)題：從某植物中分離

20、出四種化合物，其結(jié)構(gòu)如下：,(1) 試比較四種化合物的酸性，(2) 比較極性大小(3) 比較它們的Rf值大小順序： 硅膠TLC 聚酰胺TLC,A R1=R2=H B R1=H, R2=Rha C R1=Glc, R2=HD R1=Glc, R2=Rha,酸性 A>C>B>D極性 D>C>B>ARf ：A>B

21、>C>D D>B>C>A,,第三節(jié) 提取分離方法,,本章內(nèi)容,第一節(jié) 緒論第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)第三節(jié) 提取分離方法第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定第五節(jié) 結(jié)構(gòu)研究實例,一、色譜法的應(yīng)用硅膠TLC聚酰胺TLC雙向紙色譜法,,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,第一向展開：分配作用，醇性溶劑為展開劑。 如：n-BuOH-HAc-H2O上層溶液。

22、 Rf：苷元>單糖苷>雙糖苷 第二向展開：吸附作用。水性溶劑為展開劑。 如：2~6%HAc，3%NaCl等。 Rf：(1)苷元在原點附近，糖鏈越長，Rf越大； (2)苷元：黃酮(醇)，查耳酮 < 二氫黃酮 (醇)，二氫查耳酮,雙向紙色譜法,二、紫外光譜法,黃酮

23、存在桂皮?；氨郊柞；M成的交叉共軛系統(tǒng)，在200~400nm間，有兩個主要的紫外吸收帶,A環(huán)苯甲酰系統(tǒng)峰帶II，220~280nm,B環(huán)桂皮酰基系統(tǒng)峰帶I，300~400nm,共性： B環(huán)OH增加，峰帶I 紅移，特別是4‘-OH，紅移大； A環(huán)OH增加，峰帶II 紅移。,,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,（一）,1.黃酮、黃酮醇類,帶I ：黃酮類 304~350nm 黃酮醇（3-OH被取代）328

24、~357 黃酮醇（3-OH游離） 352~385帶II ：240~285nm,,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,峰帶I和II強度相似,,,,nm,I,II,,,黃酮及黃酮醇類化合物的紫外光譜帶（λMeOH max，nm）,槲皮素在甲醇中的紫外光譜,取代基的影響： 帶I ：母核上的－OH、-OCH3等供電基，可引起相應(yīng)吸收帶紅移。氧取代程度越高，帶I紅移越大。羥基甲基化或苷化，將引起紫移。 帶II：峰位主要受A-環(huán)

25、氧取代程度的影響，氧取代程度越高，帶II越向紅移。B環(huán)的取代基只影響峰形。如：只有4'-OR時，為單峰；3 ',4 ' -OR時，為雙峰。,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,,,2.查耳酮、橙酮類,,,,,nm,I,II,查耳酮 帶I 340~390nm(有裂分)帶II 220~270nm,橙酮370~430nm(3~4個峰),,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,帶I 強，帶II 次強峰,,,查耳酮 ---

26、 橙酮 - - -,異黃酮--二氫黃酮- - -,3.異黃酮、二氫黃酮(醇)類,,,,nm,I,II,只有A-環(huán)苯甲酰系統(tǒng)，帶II 為主峰帶II： 異黃酮 245~270nm 二氫黃酮（醇） 270~295nm帶I： 肩峰,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,帶I 弱，帶II 強峰,（二）利用診斷試劑，判斷羥基位置,1.甲醇鈉（NaOMe）

27、 黃酮類化合物上所有酚羥基，均可在 NaOMe 中成鹽，引起紅移。,,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,黃酮醇類： a.帶I 位移40~60nm, 強度不降。示有4’-OH. b.帶I紅移50~60nm, 強度下降。示有3-OH, 但無 4’-OH。,確定 4'-OH,二氫黃酮（醇）、異黃酮類: a. 帶II 紅移35~40nm。示有5,7-OH。 b. 帶I 移至400nm。示無5-OH

28、。,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,c. 320~330nm, 有峰，7-OH。 d. 3,4’-OH, 3,3’,4’-OH, 3’,4’,5’-OH等, 隨時間延長, 峰衰退.,黃酮醇類：,2.醋酸鈉（NaOAc） NaOAc堿性較NaOMe弱，只能使7-OH，4’-OH解離。由于未熔融的NaOAc中含微量HOAc，限制4’-OH的解離。,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,（二）利用診斷試劑，判斷羥基位置,黃酮（醇）：帶II 紅移5

29、~20nm，示有7-OH，6，8 氧取代時影響位移幅度。 二氫黃酮（醇）：帶II 紅移60nm，示有7-OH。 帶II 紅移35nm，示有5，7-OH。,確定 7-OH,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,異黃酮：帶II 紅移6~20nm，示有 7-OH，。 有5,6,7-三OH，6,7,8-三OH或3

30、,3‘,4’-三 OH時，峰隨時間衰退。,2. 醋酸鈉（NaOAc）,3. NaOAc/H3BO3 鄰二酚羥基在NaOAc堿性下，可與H3BO3螯合， 引起紅移。 黃酮（醇）：帶I 紅移12~30nm；B環(huán)具鄰二酚羥基 帶II 紅移5~10nm A環(huán)具鄰二酚羥基

31、 ( 除5,6-二OH),確定鄰二羥基,,,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,異黃酮，二氫黃酮（醇）： 帶II 紅移10~15nm， A環(huán)具鄰二酚羥基( 除5,6-二OH)。,3. NaOAc/H3BO3,4. AlCl3及AlCl3/HCl,AlCl3與 引起絡(luò)合。,,,,,生成鋁絡(luò)合物的穩(wěn)定性順序： 3-OH(黃酮醇)>5-OH(黃酮)>5-OH(二氫黃酮)>鄰

32、二酚OH>3-OH(二氫黃酮醇),第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,,鄰二酚OH和 二氫黃酮醇的 3-OH形成的絡(luò)合物遇酸分解。當(dāng)3-OH與5-OH共存時，優(yōu)先生成3-OH-4-酮基絡(luò)合物。3-OH或5-OH及鄰二酚OH同時存在，形成二絡(luò)合物。,,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,應(yīng)注意以下規(guī)律：,a. AlCl3/HCl與MeOH中光譜比較 相同時：示無3-OH或5-OH。 不同時：帶I 紅移33~55nm，示只有5-OH

33、，無3-OH時。 帶I 紅移17~20nm，示有 5-OH，且6-氧代； 帶I 紅移50~60nm，示有5-OH、3-OH； 帶I 紅移60nm，示只有3-OH時。,3-OH, 5-OH,,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,4. AlCl3及AlCl3/HCl,b. AlCl3/HCl與AlCl3中光譜比較 相同時：無鄰二酚羥基； 不同時：帶I 紫移30~4

34、0nm，示 B環(huán)有鄰二酚羥基； 帶I 紫移50~60nm，示A，B環(huán)同時有鄰二 酚羥基。,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,4. AlCl3及AlCl3/HCl,,練習(xí)：,UV ?max, nm:MeOH 259, 266sh, 299sh, 359NaOMe 272, 327, 410NaOAc 271, 325, 393NaOAc/ H3BO3 262,2

35、98,387AlCl3 275, 303sh, 433AlCl3/ HCl 271, 300, 364sh, 402,,某化合物HCl-Mg反應(yīng)（+），Molish反應(yīng)（+），ZrOCl2反應(yīng)黃色，加入枸櫞酸褪色，酸水解檢出Glc。紫外譜圖數(shù)據(jù)如下，試推斷其結(jié)構(gòu),,,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,黃酮或3-O-苷?I=410-359=51nm，4 '-OH?II=271-259=12nm, 7-OH?I=387-359=28

36、nm, B環(huán)有鄰二OHAlCl3/HCl與AlCl3相比，?I=402-433= -31nm, B環(huán)有鄰二OHAlCl3/HCl與MeOH相比，?I=402-359=43nm, 有5-OH，無3-OH,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,分析：,,1. 核磁共振氫譜（1HNMR）,A環(huán)質(zhì)子,(1). 5,7-二OH?H-6,8 5.7~6.9, d, J=2.5Hz?H-8>?H-6,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,三 核磁共振法,,6.1

37、9,6.44,6.42,6.83,(2). 7-OH? H-5：7.7~8.2, d, J=8Hz? H-6：6.4~7.1, dd, J=8 and 2Hz ? H-8：6.3~7.0, d, J=2HzH-5受C環(huán)C=O的去屏蔽作用而處于低場，化學(xué)位移大。,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,A環(huán)質(zhì)子,1. 核磁共振氫譜（1HNMR）,B環(huán)質(zhì)子,4 ? -OR 2 ?, 6 ? -H ? 7.1~8.1, d, J=8Hz

38、 3 ?, 5 ? -H ? 6.5~7.1, d, J=8Hz （兩組峰，每個峰有兩個H， AA’BB’系統(tǒng)）,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,6.93,8.10,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,3?, 4 ? –二OR 1)黃酮（醇） H-5’ ? 6.7~7.1, d, J=8.5Hz H-6’ ? ~7.9, dd, J=8.5, 2.5Hz H-2’ ? ~7.2, d, J=2.5Hz 2)異

39、黃酮，二氫黃酮（醇） H-2’,5’,6’ ? 6.7~7.1 m （峰復(fù)雜）,B環(huán)質(zhì)子,7.60,6.97, 6.99,3',4', 5' -三OR? H-2', 6' ：6.5~7.5 R=R", 為一個單峰s(2H); R?R" ，間位偶合為兩個二重峰 d(J=2Hz),第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,B環(huán)質(zhì)子,C環(huán)質(zhì)

40、子 區(qū)別各類黃酮的主要依據(jù),1)黃酮? H-3 6.3 s (常與A環(huán)質(zhì)子重疊),2) 異黃酮? H-2 7.6~7.8(用DMSO-d6作溶劑時為?8.5~8.7),第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,3) 二氫黃酮 (2位為S構(gòu)型)? H-2 5.2, dd, J=11 and 5Hz? Ha-3 2.8~3.0, dd, J=17 and 11HzHe-3 2.8, dd, J=17 and 5Hz(

41、? Ha-3 > ?He-3),C環(huán)質(zhì)子,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,5.42,3.25,2.68,4） 二氫黃酮醇? H-2 4.9, d, J=11Hz? H-3 4.3, d, J=11Hz(絕對構(gòu)型用CD或ORD測定),5） 查耳酮? H-? 6.7~7.4, d, J=17Hz? H-? 7.3~7.7, d, J=17Hz,6） 橙酮芐基質(zhì)子 ? 6.5~6.7 s,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,α,β,1）黃酮苷類

42、化合物上糖的端基質(zhì)子信號 黃酮醇-3-O-葡萄糖苷 5.70 ~ 6.00 黃酮醇-3-O-鼠李糖苷 5.00 ~ 5.10 黃酮類 -7-O-葡萄糖苷 4.80 ~ 5.20 黃酮類-4’-O-葡萄糖苷 黃酮類 -5-O-葡萄糖苷 黃酮類-6 及 8-C-糖苷,糖上質(zhì)子,第四

43、節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,2） 端基以外的糖上質(zhì)子: ?3~4, 鼠李糖C5- CH3 ?:0.8~1.2 , d, J=6.5Hz,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,其它取代基 CH3CO- 脂肪族乙酰氧基 ?1.65~2.10 (確定糖數(shù)) 芳香族乙酰氧基 ?2.30~2.50 (確定酚羥基數(shù)),CH3O- 甲氧基質(zhì)子信號一般在：? 3.50 ~ 4.10 可通過NOE核

44、磁共振技術(shù)及二維技術(shù)確定基位置。,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,－OH 溶劑一般采用DMSO-d6(無水)作測試溶劑 ? 5-OH 12.40；? 7-OH 10.9；? 3-OH 9.7 ；? 4’-OH >10(這些信號加D2O后消失),其它取代基,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,三 核磁共振法,2. 核磁共振碳譜（13CNMR）,根據(jù)C＝O的化學(xué)位移確定黃酮骨架 a. 174~184 黃酮(醇), 異黃酮,

45、 橙酮 b. 188~197 查耳酮, 二氫黃酮(醇),黃酮 104~112異黃酮122~126黃酮醇 136 橙酮 111~112,查耳酮 116~130二氫黃酮 42~45二氫黃酮醇 71,2. 核磁共振碳譜（13CNMR）,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,根據(jù)C-3的化學(xué)位移細分,取代基位移,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,2. 核磁共振碳譜（13CNMR）,,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,例：下列一個化合物的碳信號歸屬,四、

46、質(zhì)譜（MS）,1. 電子轟擊質(zhì)譜（EI-MS） 苷元：可得到M+，且為基峰； 苷：得不到M+，可得苷元碎片，可制備衍生物。2. 場解析質(zhì)譜（FD-MS）和快原子轟擊質(zhì)譜（FAB-MS） 用于測定極性較強的苷類化合物，可得到M+ ， M+ +1， M+ +Na， M+ +K峰，且給出糖基碎片峰。,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,3.黃酮類化合物苷元的EI-MS裂解途徑,途徑 I （RDA裂解）,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,利用

47、A1+和B1+可確定A環(huán)和B環(huán)的取代情況 A1+. B1+.5, 7-二羥基黃酮 152 1025, 7, 4? ?-三羥基黃酮(芹菜素) 152 1185, 7-二羥基, 4 ? -甲

48、氧基黃酮(刺槐素) 152 132,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,途徑-II：,黃酮類: 途徑-I為主 M+常為基峰, 還有[M-28]+, A1+(s), B1+(s),及[A1+H]+, [A1-28]+, B2+, [B2-28]+等。 黃酮醇類: 主要按途徑-II 進行 M+常為基峰, 碎片離子主要有B2+和[B2-28]+及[A1+H]+, 此外還有[M-H]+, [M-15]+等。,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)

49、鑒定,,五、 Wessely-Moser重排,黃酮類6-及8-C-糖苷在常規(guī)酸水解條件下不被水解，但可發(fā)生互變，成為6-和8-C-糖苷的混合物。,,第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定,,本章內(nèi)容,第一節(jié) 緒論第二節(jié) 理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)第三節(jié) 提取分離方法第四節(jié) 結(jié)構(gòu)鑒定第五節(jié) 結(jié)構(gòu)研究實例,例1：某黃色結(jié)晶I，鹽酸鎂粉反應(yīng)(＋)，Molish反應(yīng)(＋) ，F(xiàn)eCl3反應(yīng)(＋) ，ZrOCl2反應(yīng)呈黃色，但加入枸櫞酸后黃色褪去。

50、 I的UV ? nm如下: MeOH 252 267 (sh) 346 NaOMe 261 399 AlCl3 272 426 AlCl3/HCl 260 274 357 385

51、 NaOAc 254 400 NaOAc/H3BO3 256 378,I的1H-NMR (DMSO-d6, TMS) ?：7.41 (1H, dd, J = 8, 3Hz), 6.92 (1H, d, J = 8 Hz), 6.70 (1H, d, J = 3 Hz), 6.62 (1H, d, J = 2 Hz), 6.43 (1H, d, J = 2 Hz), 6.3

52、8 (1H, s), 5.05 (1H, d, J = 7 Hz)，其余略。 FAB-MS示分子中含一分子葡萄糖,苷元的分子式為C15H10O6 ,推斷化合物的結(jié)構(gòu)，并寫出推導(dǎo)過程。,化學(xué)反應(yīng)顯示該化合物為5－羥基黃酮苷，結(jié)合紫外譜II的吸收峰位示無3-OH。,NaOMe ?I=399-346=53nm，4 ’-OH NaOAc ?II=254-252=2nm, 無7-OHAlCl3 ?I=426-346=80

53、nm, B環(huán)有鄰二OHAlCl3/HCl與AlCl3相比， ?I=385-426= -41nm, B環(huán)有鄰二OHAlCl3/HCl與MeOH相比， ?I=385-346=39nm, 有5-OH，無3-OH,分析及答案：,因氫譜給出此化合物為5,7-二氧取代典型的譜學(xué)特征，結(jié)合紫外譜分析結(jié)果，說明7-OH與葡萄糖成苷。因此最終結(jié)構(gòu)如下，氫信號歸屬如下：,6.70,6.92,7.41,6.62,6.43,6.38 (1H,

54、s),5.05 (1H, d, J = 7 Hz),,例2：化合物asiaticalin（A）是從分株紫萁（Osmunda asiatica）中分得，為黃色針晶，三氯化鐵反應(yīng)：暗綠色；鎂粉-鹽酸反應(yīng)：紫紅色。元素分析：示分子式為C21H20O11。UV(?max nm):MeOH 267, 352NaOMe 275, 328, 402AlCl3 274, 301, 352, 398A

55、lCl3/HCl 276, 303, 347, 400 NaOAc 275, 305sh, 372NaOAc/H3BO3 266, 300sh, 353,示為黃酮類化合物,示為黃酮苷類,黃酮醇或苷?I=50, 4’-OH二者相同, 無鄰二OH?I=48, 只有5-OH?II=8,有7-OH同MeOH, 無鄰二OH,,第五節(jié) 結(jié)構(gòu)研究實例,,IR ?max(KBr) cm-1: 3401(OH), 165

56、5(Ar-CO), 1606, 1504(苯環(huán))1H-NMR (DMSO-d6, TMS內(nèi)標(biāo))?ppm:3.2~3.9 (6H, m)3.9~5.1 (4H, 加D2O后均消失)5.68 (1H, d, J = 8.0Hz)6.12 (1H, d, J = 2.0Hz)6.42 (1H, d, J = 2.0Hz)6.86 (2H, d, J = 9.0Hz)8.08 (2H, d, J = 9.0Hz),糖上6個H糖

57、上OH糖端基質(zhì)子, H-1”A環(huán)H-6A環(huán)H-8B環(huán)H-3’, 5’B環(huán)H-2’, 6’,苷元的確定: 將A用2% H2SO4水解, 水解液經(jīng)純化得苷元, 與標(biāo)準(zhǔn)品對照為山奈酚(5, 7, 4‘-三OH 黃酮醇).糖基的確定: 水解液經(jīng)中和后,與標(biāo)準(zhǔn)品對照, 進行PC,TLC及糖分析儀測定, 確認為?-D-allose.,練習(xí)3: 某黃色結(jié)晶I，鹽酸鎂粉反應(yīng)(＋)，Molish反應(yīng)(-) ，F(xiàn)eCl3反應(yīng)(＋)，其碳