高溫對(duì)體外培養(yǎng)神經(jīng)元生物學(xué)特性的影響.pdf

1、該研究旨在建立體外培養(yǎng)神經(jīng)元高溫?fù)p傷模型的基礎(chǔ)上,探討高溫?fù)p傷后神經(jīng)元的形態(tài)、凋亡及細(xì)胞活力等生物學(xué)改變,并初步探討預(yù)熱對(duì)體外培養(yǎng)神經(jīng)元的保護(hù)作用,希望能為高溫?fù)p傷的機(jī)制及治療做一些有益的基礎(chǔ)工作.該實(shí)驗(yàn)在我室首先建立了小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元高溫?fù)p傷模型,在此基礎(chǔ)上,將培養(yǎng)的皮質(zhì)神經(jīng)元分為未經(jīng)高溫處理的對(duì)照組、高溫處理的實(shí)驗(yàn)組,采用倒置顯微鏡、HE染色方法、DNA聚合酶-Ⅰ Klenow大片段介導(dǎo)的生物素標(biāo)記的dATP末端標(biāo)記方法(Klen

2、ow法)等方法,觀察對(duì)照組及處理組各溫度下?lián)p傷的神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化,檢測(cè)DNA斷裂損傷情況.該次實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果如下:[1]光鏡觀察:在倒置顯微鏡下,正常神經(jīng)細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶消化后呈圓形.接種培養(yǎng)后10h,胞體增大呈圓形或橢圓形,分散的神經(jīng)細(xì)胞開始貼壁.16h貼壁細(xì)胞增多并有突起長(zhǎng)出,胞體呈梭形或三角形,雙突起多見,突起末端可見生長(zhǎng)錐.24h后大部分神經(jīng)細(xì)胞貼壁,突起延長(zhǎng),開始相互連接.3天后細(xì)胞胞體進(jìn)一步增大,突起繼續(xù)增長(zhǎng),相互連接成神經(jīng)網(wǎng)

3、絡(luò).7天時(shí)對(duì)照組細(xì)胞光暈明顯,胞體飽滿并聚集成團(tuán),細(xì)胞團(tuán)間有粗大的突起并相互連接,神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)稠密.處理組高溫后漂浮細(xì)胞增加,神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目減少,神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)稀疏,有的細(xì)胞突起漂浮,有的失去突起,呈圓形或橢圓形.這種形態(tài)改變溫度越高越明顯.39℃時(shí)部分細(xì)胞壞死,胞體碎裂.42℃大部分細(xì)胞出現(xiàn)壞死,胞體碎裂,突起漂浮或消失.[2]HE染色顯示:光鏡下觀察,細(xì)胞質(zhì)呈淡紅色,細(xì)胞核呈淡藍(lán)紫色.未經(jīng)高溫處理組神經(jīng)元形態(tài)正常,胞核清晰可見,高溫處理后部分細(xì)

4、胞出現(xiàn)形態(tài)變化,胞體皺縮或腫脹,隨著處理溫度的增高,神經(jīng)元胞體變小,胞質(zhì)濃縮,核染色質(zhì)凝集,突起變短,變細(xì),42℃高溫處理后細(xì)胞數(shù)量明顯減少.[3]Klenow法檢測(cè)顯示:未經(jīng)高溫處理的對(duì)照組神經(jīng)元經(jīng)Klenow法檢測(cè)的結(jié)果為69.54±1.70,39 ℃時(shí)達(dá)高峰133.40±4.49,而后又逐漸降低.經(jīng)過方差分析,不同溫度平均灰度不同(p<0.01),各組與對(duì)照組比較有差異.未經(jīng)預(yù)熱處理的對(duì)照組神經(jīng)元37℃經(jīng)Klenow法檢測(cè)的結(jié)果為